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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 构建植物过表达载体需不需要加入目的片段前的5'UTR？
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冷霜晓月

新虫 (初入文坛)

[求助] 构建植物过表达载体需不需要加入目的片段前的5'UTR？

不加入是否会导致将来翻译时核糖体没有结合位点，无法翻译出蛋白？如果可以不加入5'UTR只用CDS，没有5'UTR，核糖体又是怎么识别该mRNA片段再进行翻译的？实验室有的人说可以不用，但又没解释个所以然出来，希望有大神能解释一下~~~~
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1楼 2016-02-03 12:52:28
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jackyoung

新虫 (正式写手)
首先你基本原理不清楚，建议你细读基因或者基因的分子生物学相关章节。

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CestLaVie
2楼2016-02-03 17:40:58
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jackyoung

新虫 (正式写手)
另外，植物表达的话，如果不是要去研究5'-UTR，或者有文献说没有它不行，一般只研究编码基因功能的超表达建议只用完整的ORF区域。

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CestLaVie
3楼2016-02-03 17:43:29
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冷霜晓月

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jackyoung at 2016-02-03 17:43:29
另外，植物表达的话，如果不是要去研究5'-UTR，或者有文献说没有它不行，一般只研究编码基因功能的超表达建议只用完整的ORF区域。

能明确解释下么？翻了书也没找着解释这块的
就想知道为什么可以只研究编码基因功能的超表达建议只用完整的ORF区域？5'UTR部分不是有核糖体的结合部位么？
而且实验室其他人说保险起见，基本上构载体的时候都会在起始密码子之前加十几二十bp左右的5'UTR部分，并不是只用完整的ORF区域。不过有的时候不加也能表达出蛋白，但我就好奇不加的话，新转进去基因转录出来的mRNA序列不是就直接从AUG开始了么，核糖体是怎么识别新mRNA翻译出蛋白的，不是只要有5'UTR特定的核苷酸序列才能被核糖体识别的么？
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4楼2016-02-06 21:33:47
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jackyoung

新虫 (正式写手)
那本书告诉你5'-UTR就是核糖体结合位点了？那让没有UTR的基因情何以堪？是不是很多原核生物的基因都不用翻译蛋白了？很多时候大家只是为了设计引物和克隆方便而已，还有弱弱的说一句，很多载体在启动子下游的多克隆位点是有一段多余序列的。仔细查查书吧，看懂不容易……

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CestLaVie
5楼2016-02-06 21:54:28
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bioplant

木虫 (正式写手)
2楼算脾气好的啦，现在许多学生和楼主一样基础没掌握就上战场，书看得太少、少浅。

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6楼2016-02-07 00:23:45
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jackyoung

新虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bioplant at 2016-02-07 00:23:45
2楼算脾气好的啦，现在许多学生和楼主一样基础没掌握就上战场，书看得太少、少浅。

大家都觉得生物简单，刚刚开始学的时候也是有死记硬背的感觉，后来才发现学生物需要理解原理和兼顾细节，需要综合运用所学的各个学科的知识逻辑推理，甚至是曾经厌恶至极没有好好学的数学，不过好在可以规避思想政治那一套，也算幸运了。
建议多看看外文原版书（少看译本，很多译本赶时间，不但没有纠正原版错误，还会引入很多。同时，很多术语和表达可能并不准确。其实很多东西也是大佬做主编挂个名，一帮懵懂小硕闷头查遍金山、有道、谷歌翻译出来的，最后找个高年级博士查校一番…），外文书的讲解方式很适合引发兴趣。多看看关于某个理论或知识点的原始文献，不能总是像国内教学所追求的记住结论。

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CestLaVie
7楼2016-02-07 08:55:07
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27525242

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jackyoung at 2016-02-07 08:55:07
大家都觉得生物简单，刚刚开始学的时候也是有死记硬背的感觉，后来才发现学生物需要理解原理和兼顾细节，需要综合运用所学的各个学科的知识逻辑推理，甚至是曾经厌恶至极没有好好学的数学，不过好在可以规避思想政 ...

请问，能帮忙推荐一些外文的分子书籍么？讲的有基础知识的，还是gene X这一类的就可以？

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8楼2017-06-19 09:44:09
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