应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 请教关于用大肠杆菌破碎液催化后反应液中蛋白怎么可以较快去掉
131/2返回列表12下一页
查看: 1784  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

402222903

木虫 (正式写手)

[求助] 请教关于用大肠杆菌破碎液催化后反应液中蛋白怎么可以较快去掉 已有4人参与

各位大神，本人最近在做用重组大肠杆菌发酵产酶破碎液催化的中试，现在每次催化完反应液，过滤非常慢，尝试过三足式离心机，压滤，加氯化钙絮凝抽滤，加硅藻土抽滤，都非常缓慢，请问各位大神在做大肠杆菌细胞破碎液催化时，此类问题是怎么解决的啊，目前只做到500L的反应，都非常难，估计做更大规模的就更难了，望赐教
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-01-26 15:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
402222903: 金币+6, ★★★很有帮助 2016-01-27 21:24:26
陶瓷膜，另外产物若是小分子，就加一些蛋白变性剂，或者煮一下让蛋白变性絮凝，在过滤或离心，看你的产物是啥。

或者反应完了先萃取，再在萃取液里面处理，比如旋蒸啊之类的。以前做双歧杆菌转化甾醇的那个项目，就是转化完，然后萃取出来，然后旋蒸完事，纯度95%是有的。祝顺利
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-01-27 09:31:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

a2703521

金虫 (小有名气)

123

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
402222903: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-01-27 21:27:39
用微滤和超滤系统，有相关的设备可以购买。500L一个小时都不要就搞定了，而且蛋白的去除量应该能做到99%以上，残余蛋白少于1%
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-26 16:21:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

萃取用的有机溶剂可以重复使用，不用增加多少成本的
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-27 09:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

402222903

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2016-01-27 09:31:33
陶瓷膜，另外产物若是小分子，就加一些蛋白变性剂，或者煮一下让蛋白变性絮凝，在过滤或离心，看你的产物是啥。

或者反应完了先萃取，再在萃取液里面处理，比如旋蒸啊之类的。以前做双歧杆菌转化甾醇的那个项目， ...

产物是小分子，两三百的分子量，尝试过加氯化钙絮凝，但是效果不佳，变性剂有哪些呢？还有，做萃取啊，我后面以前是在过滤过后加足量食言，加等量醇类萃取的，后面旋蒸的，再结晶，如果按照你说的先做萃取会不会出现严重乳化啊？谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2016-01-27 21:24:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

402222903

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a2703521 at 2016-01-26 16:21:40
用微滤和超滤系统，有相关的设备可以购买。500L一个小时都不要就搞定了，而且蛋白的去除量应该能做到99%以上，残余蛋白少于1%

我的反应液中有20-40%的异丙醇，能不能用超滤处理啊？好像目前用的超滤都是有机膜吧
赞一下 回复此楼
6楼2016-01-27 21:27:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a2703521

金虫 (小有名气)

123
引用回帖:
6楼: Originally posted by 402222903 at 2016-01-27 21:27:23
我的反应液中有20-40%的异丙醇，能不能用超滤处理啊？好像目前用的超滤都是有机膜吧...

是不是可以先用旋蒸把异丙醇去除，然后再用膜系统呢
赞一下 回复此楼
7楼2016-01-28 09:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianbenlxj

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
402222903: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-02-01 18:55:02
用高速管式离心机分离。
赞一下 回复此楼
8楼2016-01-31 14:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

402222903

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by a2703521 at 2016-01-28 09:41:51
是不是可以先用旋蒸把异丙醇去除，然后再用膜系统呢...

这个能蒸完么？
回复此楼
9楼2016-02-01 18:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 402222903 at 2016-01-27 21:24:13
产物是小分子，两三百的分子量，尝试过加氯化钙絮凝，但是效果不佳，变性剂有哪些呢？还有，做萃取啊，我后面以前是在过滤过后加足量食言，加等量醇类萃取的，后面旋蒸的，再结晶，如果按照你说的先做萃取会不会出 ...

你的考虑是有道理的，先萃取可能杂质会停留在中间层，越来越多。建议：
1 加热至50-60度，维持20min（不破坏目标组分的话），然后陶瓷膜过滤。
2 异丙醇是否回收利用，产物与底物的极性差别大？若是，减压蒸馏除异丙醇，余液比重增加，便于进一步萃取。盐会腐蚀设备。
3 固定化酶或把酶固是在胞内再去催化是否更好。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
职业无分贵贱，做事要有格调
10楼2016-02-03 13:41:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 402222903 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:35 by bingxueer79
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +3 xbxudjdn 2026-03-18 3/150 2026-03-18 22:14 by zhq0425
[考研] 274求调剂 +5 S.H1 2026-03-18 5/250 2026-03-18 21:27 by guosr9609
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +16 不知道叫什么！ 2026-03-15 18/900 2026-03-17 17:05 by ruiyingmiao
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 328求调剂 +3 5201314Lsy！ 2026-03-13 6/300 2026-03-14 15:31 by hyswxzs
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭