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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 请教关于用大肠杆菌破碎液催化后反应液中蛋白怎么可以较快去掉
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402222903

木虫 (正式写手)

[求助] 请教关于用大肠杆菌破碎液催化后反应液中蛋白怎么可以较快去掉 已有4人参与

各位大神，本人最近在做用重组大肠杆菌发酵产酶破碎液催化的中试，现在每次催化完反应液，过滤非常慢，尝试过三足式离心机，压滤，加氯化钙絮凝抽滤，加硅藻土抽滤，都非常缓慢，请问各位大神在做大肠杆菌细胞破碎液催化时，此类问题是怎么解决的啊，目前只做到500L的反应，都非常难，估计做更大规模的就更难了，望赐教
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1楼 2016-01-26 15:43:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
402222903: 金币+6, ★★★很有帮助 2016-01-27 21:24:26
陶瓷膜，另外产物若是小分子，就加一些蛋白变性剂，或者煮一下让蛋白变性絮凝，在过滤或离心，看你的产物是啥。

或者反应完了先萃取，再在萃取液里面处理，比如旋蒸啊之类的。以前做双歧杆菌转化甾醇的那个项目，就是转化完，然后萃取出来，然后旋蒸完事，纯度95%是有的。祝顺利
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3楼2016-01-27 09:31:33
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普通回帖

a2703521

金虫 (小有名气)

123

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
402222903: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-01-27 21:27:39
用微滤和超滤系统，有相关的设备可以购买。500L一个小时都不要就搞定了，而且蛋白的去除量应该能做到99%以上，残余蛋白少于1%
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2楼2016-01-26 16:21:40
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

萃取用的有机溶剂可以重复使用，不用增加多少成本的
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4楼2016-01-27 09:32:43
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402222903

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2016-01-27 09:31:33
陶瓷膜，另外产物若是小分子，就加一些蛋白变性剂，或者煮一下让蛋白变性絮凝，在过滤或离心，看你的产物是啥。

或者反应完了先萃取，再在萃取液里面处理，比如旋蒸啊之类的。以前做双歧杆菌转化甾醇的那个项目， ...

产物是小分子，两三百的分子量，尝试过加氯化钙絮凝，但是效果不佳，变性剂有哪些呢？还有，做萃取啊，我后面以前是在过滤过后加足量食言，加等量醇类萃取的，后面旋蒸的，再结晶，如果按照你说的先做萃取会不会出现严重乳化啊？谢谢
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5楼2016-01-27 21:24:13
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402222903

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a2703521 at 2016-01-26 16:21:40
用微滤和超滤系统，有相关的设备可以购买。500L一个小时都不要就搞定了，而且蛋白的去除量应该能做到99%以上，残余蛋白少于1%

我的反应液中有20-40%的异丙醇，能不能用超滤处理啊？好像目前用的超滤都是有机膜吧
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6楼2016-01-27 21:27:23
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a2703521

金虫 (小有名气)

123
引用回帖:
6楼: Originally posted by 402222903 at 2016-01-27 21:27:23
我的反应液中有20-40%的异丙醇，能不能用超滤处理啊？好像目前用的超滤都是有机膜吧...

是不是可以先用旋蒸把异丙醇去除，然后再用膜系统呢
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7楼2016-01-28 09:41:51
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tianbenlxj

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
402222903: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-02-01 18:55:02
用高速管式离心机分离。
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8楼2016-01-31 14:45:21
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402222903

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by a2703521 at 2016-01-28 09:41:51
是不是可以先用旋蒸把异丙醇去除，然后再用膜系统呢...

这个能蒸完么？
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9楼2016-02-01 18:54:15
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 402222903 at 2016-01-27 21:24:13
产物是小分子，两三百的分子量，尝试过加氯化钙絮凝，但是效果不佳，变性剂有哪些呢？还有，做萃取啊，我后面以前是在过滤过后加足量食言，加等量醇类萃取的，后面旋蒸的，再结晶，如果按照你说的先做萃取会不会出 ...

你的考虑是有道理的，先萃取可能杂质会停留在中间层，越来越多。建议：
1 加热至50-60度，维持20min（不破坏目标组分的话），然后陶瓷膜过滤。
2 异丙醇是否回收利用，产物与底物的极性差别大？若是，减压蒸馏除异丙醇，余液比重增加，便于进一步萃取。盐会腐蚀设备。
3 固定化酶或把酶固是在胞内再去催化是否更好。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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职业无分贵贱，做事要有格调
10楼2016-02-03 13:41:23
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