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402222903

木虫 (正式写手)

[求助] 请教关于用大肠杆菌破碎液催化后反应液中蛋白怎么可以较快去掉 已有4人参与

各位大神,本人最近在做用重组大肠杆菌发酵产酶破碎液催化的中试,现在每次催化完反应液,过滤非常慢,尝试过三足式离心机,压滤,加氯化钙絮凝抽滤,加硅藻土抽滤,都非常缓慢,请问各位大神在做大肠杆菌细胞破碎液催化时,此类问题是怎么解决的啊,目前只做到500L的反应,都非常难,估计做更大规模的就更难了,望赐教
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 402222903 at 2016-01-27 21:24:13
产物是小分子,两三百的分子量,尝试过加氯化钙絮凝,但是效果不佳,变性剂有哪些呢?还有,做萃取啊,我后面以前是在过滤过后加足量食言,加等量醇类萃取的,后面旋蒸的,再结晶,如果按照你说的先做萃取会不会出 ...

你的考虑是有道理的,先萃取可能杂质会停留在中间层,越来越多。建议:
1 加热至50-60度,维持20min(不破坏目标组分的话),然后陶瓷膜过滤。
2 异丙醇是否回收利用,产物与底物的极性差别大?若是,减压蒸馏除异丙醇,余液比重增加,便于进一步萃取。盐会腐蚀设备。
3 固定化酶或把酶固是在胞内再去催化是否更好。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
职业无分贵贱,做事要有格调
10楼2016-02-03 13:41:23
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a2703521

金虫 (小有名气)

123

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
402222903: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-01-27 21:27:39
用微滤和超滤系统,有相关的设备可以购买。500L一个小时都不要就搞定了,而且蛋白的去除量应该能做到99%以上,残余蛋白少于1%
2楼2016-01-26 16:21:40
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
402222903: 金币+6, ★★★很有帮助 2016-01-27 21:24:26
陶瓷膜,另外产物若是小分子,就加一些蛋白变性剂,或者煮一下让蛋白变性絮凝,在过滤或离心,看你的产物是啥。

或者反应完了先萃取,再在萃取液里面处理,比如旋蒸啊之类的。以前做双歧杆菌转化甾醇的那个项目,就是转化完,然后萃取出来,然后旋蒸完事,纯度95%是有的。祝顺利
3楼2016-01-27 09:31:33
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

萃取用的有机溶剂可以重复使用,不用增加多少成本的
4楼2016-01-27 09:32:43
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