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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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七星桥缘

新虫 (初入文坛)

[求助] Sephadex G75分离纯化蛋白 已有3人参与

Sephadex G75孔径有多大?Sephadex G75层析时收集了10个柱体积,但是测不到样品,请问是什么原因?蛋白分子量大概50KDa。
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

上样量太小了。既然知道带负电荷,那用阴离子交换层析分离好了,凝胶过滤的上样量很小,所以你上样前要浓缩,尽可能减少上样体积,一般柱体积的10分之1,然后尽可能增加上样液的浓度。祝顺利。
6楼2016-01-25 09:20:40
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查看全部 9 个回答

a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
多大孔径不太清楚,但是这是个凝胶过滤的柱料,一个柱体积左右所有组分就应该都出来了。用的什么方法测的样品?紫外280?
2楼2016-01-21 13:59:20
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追梦de蜗牛

银虫 (小有名气)

上样液浓度如何?G系列的填料会存在筛分效应,稀释你的样品,一般至少会稀释一倍。你蛋白带电性如何,样品会不会吸附在了填料上?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-21 14:14:29
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七星桥缘

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 追梦de蜗牛 at 2016-01-21 14:14:29
上样液浓度如何?G系列的填料会存在筛分效应,稀释你的样品,一般至少会稀释一倍。你蛋白带电性如何,样品会不会吸附在了填料上?

蛋白带负电,上样100微克,pH7.4磷酸液当洗脱液,感觉稀释了好多倍……
4楼2016-01-21 14:31:32
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