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czcpudai

铜虫 (正式写手)

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[求助] 5000Da蛋白 Sephadex G-50分离的情况

请问各位有没有人用Sephadex G-50来分离小分子肽的，本人分离的是5000Da的蛋白，柱子是1cmX40cm的。根据G-50的分离范围为1500-30KD，按照道理的话，5000Da的蛋白应该是完全渗透的。洗脱一个柱体积（40ml），收集的每管蛋白跑胶后，没有发现目的蛋白。这是什么原因？洗脱体积不够吗？蛋白浓度较低原因？

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1楼 2013-06-29 16:08:42

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wander8899

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【答案】应助回帖

★ ★
czcpudai(zhychen2008代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2013-07-04 22:43:57

5Kda可以进入G-50的孔隙中，一个柱体积肯定不能洗脱的，最先出来的是大于30Kda的蛋白质。而且你的柱子太短，至少要90cm，才能有分离效果。如果觉得是浓度太低为何不测一下OD280，可知蛋白浓度。SDS-page的检测范围是大于2微克的蛋白量。

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2楼2013-07-04 16:39:52

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czcpudai

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引用回帖:

2楼: Originally posted by wander8899 at 2013-07-04 16:39:52
5Kda可以进入G-50的孔隙中，一个柱体积肯定不能洗脱的，最先出来的是大于30Kda的蛋白质。而且你的柱子太短，至少要90cm，才能有分离效果。如果觉得是浓度太低为何不测一下OD280，可知蛋白浓度。SDS-page的检测范围是 ...

非常感谢啊~~~ 我觉得一个柱体积也是太少了，所以打算洗个5，6个柱体积再看看。我的蛋白跑tricine-sds-page,可能是我配的胶问题，在5000kd看不到。打算重新做一下~

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3楼2013-07-05 09:24:45

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