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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » Sephadex G75分离纯化蛋白
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七星桥缘

新虫 (初入文坛)

[求助] Sephadex G75分离纯化蛋白 已有3人参与

Sephadex G75孔径有多大？Sephadex G75层析时收集了10个柱体积，但是测不到样品，请问是什么原因？蛋白分子量大概50KDa。
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1楼 2016-01-21 10:08:53
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a86052

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多大孔径不太清楚，但是这是个凝胶过滤的柱料，一个柱体积左右所有组分就应该都出来了。用的什么方法测的样品？紫外280？
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2楼2016-01-21 13:59:20
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追梦de蜗牛

银虫 (小有名气)
上样液浓度如何？G系列的填料会存在筛分效应，稀释你的样品，一般至少会稀释一倍。你蛋白带电性如何，样品会不会吸附在了填料上？

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3楼2016-01-21 14:14:29
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七星桥缘

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 追梦de蜗牛 at 2016-01-21 14:14:29
上样液浓度如何？G系列的填料会存在筛分效应，稀释你的样品，一般至少会稀释一倍。你蛋白带电性如何，样品会不会吸附在了填料上？

蛋白带负电，上样100微克，pH7.4磷酸液当洗脱液，感觉稀释了好多倍……
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4楼2016-01-21 14:31:32
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追梦de蜗牛

银虫 (小有名气)
你柱子的柱高多少？填料体积多少？会不会上样量太少了，

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5楼2016-01-21 14:36:02
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

上样量太小了。既然知道带负电荷，那用阴离子交换层析分离好了，凝胶过滤的上样量很小，所以你上样前要浓缩，尽可能减少上样体积，一般柱体积的10分之1，然后尽可能增加上样液的浓度。祝顺利。
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6楼2016-01-25 09:20:40
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
这个建议用G100或者S100分离，凝胶过滤的，一个柱体积物质就出来了！层析介质选的不合适，祝顺利

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7楼2016-01-30 15:46:51
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hc2015

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告，其它区发广告仍属违规 2016-05-05 22:16:14
本帖内容被屏蔽
8楼2016-02-15 11:21:07
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hc2015

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告，其它区发广告仍属违规 2016-05-05 22:16:23
本帖内容被屏蔽
9楼2016-02-15 11:22:33
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