24小时热门版块排行榜    

查看: 543  |  回复: 4

amberhwk

新虫 (小有名气)

[求助] 转化鉴定 已有1人参与

转化后平板长菌,但是摇菌后菌落pcr没有目的条带,会是什么原因,已经挑菌很多次,大家一般是直接5ml液体培养基摇菌还是Ep管摇菌,阳性验证好再扩大呢

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amberhwk: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-01-21 14:37:06
内容已删除

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-01-21 10:50:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amberhwk

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-21 10:50:40
我一般是使用EP管,里面加200μl抗性培养基,将单克隆挑取到里面。摇浓了之后,取1μl进行菌落PCR检测,正确了则把剩下的菌液加到5ml抗性培养基中进行扩大。

PCR扩增不出来的原因有很多,我一般采用质粒上的外围 ...

刚开始做很多都不太明白,外围引物是什么意思

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-01-21 14:36:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by amberhwk at 2016-01-21 14:36:44
刚开始做很多都不太明白,外围引物是什么意思
...

就是质粒上的一对引物,通常在多克隆位点的两侧,您的基因插入其中。
以pET系列质粒举例,有外围引物T7-promoter primer和T7 terminator primer。这之间如果不插入基因的话,扩增长度大概在一百多bp左右。
这样的好处是,无论你插入什么基因,都可以用这一对引物进行验证。
并且,这对外围引物通常很容易就能够将其中的序列扩增出来。如果没有条带,说明PCR有问题,而不是其中没有插入基因。
4楼2016-01-21 15:29:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amberhwk

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-21 15:29:32
就是质粒上的一对引物,通常在多克隆位点的两侧,您的基因插入其中。
以pET系列质粒举例,有外围引物T7-promoter primer和T7 terminator primer。这之间如果不插入基因的话,扩增长度大概在一百多bp左右。
这样的 ...

哦明白了,谢谢解答

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-01-21 16:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 amberhwk 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +4 Ldrop2023 2026-08-13 4/200 2026-08-14 14:50 by Tide man
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +19 医学老男孩 2026-08-13 43/2150 2026-08-14 13:34 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +5 cratir 2026-08-14 9/450 2026-08-14 12:25 by 医学老男孩
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
信息提示
请填处理意见