24小时热门版块排行榜    

查看: 541  |  回复: 4

amberhwk

新虫 (小有名气)

[求助] 转化鉴定 已有1人参与

转化后平板长菌,但是摇菌后菌落pcr没有目的条带,会是什么原因,已经挑菌很多次,大家一般是直接5ml液体培养基摇菌还是Ep管摇菌,阳性验证好再扩大呢

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amberhwk: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-01-21 14:37:06
内容已删除

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2016-01-21 10:50:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amberhwk

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-21 10:50:40
我一般是使用EP管,里面加200μl抗性培养基,将单克隆挑取到里面。摇浓了之后,取1μl进行菌落PCR检测,正确了则把剩下的菌液加到5ml抗性培养基中进行扩大。

PCR扩增不出来的原因有很多,我一般采用质粒上的外围 ...

刚开始做很多都不太明白,外围引物是什么意思

发自小木虫IOS客户端
3楼2016-01-21 14:36:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by amberhwk at 2016-01-21 14:36:44
刚开始做很多都不太明白,外围引物是什么意思
...

就是质粒上的一对引物,通常在多克隆位点的两侧,您的基因插入其中。
以pET系列质粒举例,有外围引物T7-promoter primer和T7 terminator primer。这之间如果不插入基因的话,扩增长度大概在一百多bp左右。
这样的好处是,无论你插入什么基因,都可以用这一对引物进行验证。
并且,这对外围引物通常很容易就能够将其中的序列扩增出来。如果没有条带,说明PCR有问题,而不是其中没有插入基因。
4楼2016-01-21 15:29:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amberhwk

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-21 15:29:32
就是质粒上的一对引物,通常在多克隆位点的两侧,您的基因插入其中。
以pET系列质粒举例,有外围引物T7-promoter primer和T7 terminator primer。这之间如果不插入基因的话,扩增长度大概在一百多bp左右。
这样的 ...

哦明白了,谢谢解答

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-01-21 16:37:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 amberhwk 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见