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乐乐male

新虫 (初入文坛)

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[求助] PCR扩增产物跑8%的PAGE胶，带都是虚的，怎么办？已有5人参与

扩增片段是450，pcr程序为95 ℃ 5 min
                                       95 ℃ 30 min
                                       58 ℃ 45 min
                                       72 ℃    45 min
                                          保温
点样是2uL，电压250，电流240

结果就是图上的那样，带特别虚，有拖尾，这是什么原因啊？求帮助

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1楼 2016-01-19 16:10:50

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lifechuteng

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

7楼: Originally posted by 乐乐male at 2016-01-20 09:14:33
不是SSCP，
我是做基因精细定位的，这是SNP引物，因为片段太大了，我这都跑胶跑了快4个小时了，才跑了这么一点距离

跑的带太虚了，感觉带没有跑开！！！这是什么原因呢？...

8%的page分离范围不合适，450bp的条带应该不太能跑的动

丙烯酰胺(%) 有效分离范围(bp) 溴酚兰* 二甲苯青*
3.5 100～2000 100 460
5.0 80～500 65 260
8.0 60～400 45 160
12.0 40～200 30 70
15.0 25～150 15 60
20.0 10～100 12 45

你可以对应这个表看一下，我认为您需要浓度更小一点的胶