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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR扩增产物跑8%的PAGE胶，带都是虚的，怎么办？
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乐乐male

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR扩增产物跑8%的PAGE胶，带都是虚的，怎么办？ 已有5人参与

扩增片段是450，pcr程序为95 ℃    5 min
                                          95 ℃    30 min
                                          58 ℃    45 min
                                          72 ℃     45 min
                                             保温
点样是2uL，电压250，电流240



结果就是图上的那样，带特别虚，有拖尾，这是什么原因啊？求帮助

PCR扩增产物跑8%的PAGE胶，带都是虚的，怎么办？
RGZFU4{GA{2_NJ7Q8IR`2TE.png
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1楼 2016-01-19 16:10:50
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这是跑的什么胶额

发自小木虫Android客户端
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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-01-19 18:05:05
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
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3楼2016-01-19 19:15:31
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-23 22:44:34
您是做sscp吗？我查到的貌似小于300bp的产物才会有比较高的成功率。
而且感觉您的电泳跑的有点短啊……刚跑出去没多久……
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2016-01-20 09:07:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 乐乐male at 2016-01-20 09:14:33
不是SSCP，
我是做基因精细定位的，这是SNP引物，因为片段太大了，我这都跑胶跑了快4个小时了，才跑了这么一点距离


跑的带太虚了，感觉带没有跑开！！！这是什么原因呢？...

8%的page分离范围不合适，450bp的条带应该不太能跑的动

丙烯酰胺(%)        有效分离范围(bp)        溴酚兰*        二甲苯青*
3.5        100～2000        100        460
5.0        80～500        65        260
8.0        60～400        45        160
12.0        40～200        30        70
15.0        25～150        15        60
20.0        10～100        12        45

你可以对应这个表看一下，我认为您需要浓度更小一点的胶
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8楼2016-01-20 09:51:08
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普通回帖

乐乐male

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 青蛙快飞 at 2016-01-19 19:15:31
450琼脂糖就可以，为什么要用page?

我们这是SNP标记
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4楼2016-01-20 08:33:43
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乐乐male

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-19 18:05:05
你这是跑的什么胶额

PAGE胶
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5楼2016-01-20 08:52:53
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乐乐male

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-20 09:07:45
您是做sscp吗？我查到的貌似小于300bp的产物才会有比较高的成功率。
而且感觉您的电泳跑的有点短啊……刚跑出去没多久……

不是SSCP，
我是做基因精细定位的，这是SNP引物，因为片段太大了，我这都跑胶跑了快4个小时了，才跑了这么一点距离


跑的带太虚了，感觉带没有跑开！！！这是什么原因呢？
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7楼2016-01-20 09:14:33
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乐乐male

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-20 09:51:08
8%的page分离范围不合适，450bp的条带应该不太能跑的动

丙烯酰胺(%)        有效分离范围(bp)        溴酚兰*        二甲苯青*
3.5        100～2000        100        460
5.0        80～500        65        260
8.0        60～400        45        160
12.0        40～200        30        70
15.0        25～150 ...

我试了6%，能跑下去，但是带还是虚的！
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9楼2016-01-21 09:01:10
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xiaowoodworm

金虫 (正式写手)
明显PAGE胶的问题，电泳液的问题和电压电流问题，最有可能就是后者，再就是电泳时间搞长点，多跑会

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10楼2016-01-21 11:15:39
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