| 查看: 1407 | 回复: 24 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
His标签木聚糖酶不挂住已有4人参与
|
|||
|
已经做了好几次纯化了，均不挂住，在穿透液里就流出来了，洗脱液里只有一点点，我是通过测木聚糖酶活来看的，看颜色的深浅。 我测的是Xyn-II等电点是8.7 具体做法是，1．缓冲液准备 A液，1XTris-HCl缓冲液pH8.0，含有8~20mM咪唑 B液，1XTris-HCl缓冲液pH8.0，含有8~80mM咪唑 C液，1XTris-HCl缓冲液pH8.0，含有250mM咪唑 2．样品的准备 收集细菌或者细胞，以适当体积的A液重悬，超声破碎，或采用其他酶解方法破碎细胞，高速离心除去细胞碎片，取上清备用 3.亲和层析柱的准备 50%的琼脂糖珠，颠倒重悬混匀，取1ml混悬液加入层析柱中，水分靠重力过滤除去，得到0.5ml柱床体积的琼脂糖珠。加入5倍柱床体积的A液（2.5ml）平衡琼脂糖珠。 4.上样 上述步骤2得到的上清，分批加入层析柱，过滤流出的液体为穿透液 5.以10倍柱床体积的B液，洗涤琼脂糖珠，过滤流出的液体为洗涤液 6.以6倍柱床体积的C液，洗脱蛋白（洗脱的蛋白一般在第一体积和第二体积，第三积仅有很少量。一般第一体积杂蛋白较多，第二体积蛋白较纯）过滤流出的液体为洗脱液 完全按照说明书来做的 后来导师说是不挂住，我就用了8M的尿素，直接加到上述2样品准备的粗酶液里孵育半小时，可是还是不挂住~我用的质粒时老板从外国要过来了，有原始论文，论文里用的是阳离子交换色谱法，导师让我 用NI-NTA亲和层析，研一刚接触试验，有好多不太明白的地方，希望大家授业解惑~~感激不尽~ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有211人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
9楼2016-01-16 22:22:57
2楼2016-01-16 16:23:12
pennchem
专家顾问 (正式写手)
-
专家经验: +21 - MolEPI: 1
- 应助: 297 (大学生)
- 金币: 10286.7
- 散金: 65
- 红花: 28
- 帖子: 595
- 在线: 1093.9小时
- 虫号: 2139205
- 注册: 2012-11-21
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学
3楼2016-01-16 17:16:28
4楼2016-01-16 17:38:50