| 查看: 1572 | 回复: 24 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
His标签木聚糖酶不挂住 已有4人参与
|
||
|
已经做了好几次纯化了，均不挂住，在穿透液里就流出来了，洗脱液里只有一点点，我是通过测木聚糖酶活来看的，看颜色的深浅。 我测的是Xyn-II等电点是8.7 具体做法是，1．缓冲液准备 A液，1XTris-HCl缓冲液pH8.0，含有8~20mM咪唑 B液，1XTris-HCl缓冲液pH8.0，含有8~80mM咪唑 C液，1XTris-HCl缓冲液pH8.0，含有250mM咪唑 2．样品的准备 收集细菌或者细胞，以适当体积的A液重悬，超声破碎，或采用其他酶解方法破碎细胞，高速离心除去细胞碎片，取上清备用 3.亲和层析柱的准备 50%的琼脂糖珠，颠倒重悬混匀，取1ml混悬液加入层析柱中，水分靠重力过滤除去，得到0.5ml柱床体积的琼脂糖珠。加入5倍柱床体积的A液（2.5ml）平衡琼脂糖珠。 4.上样 上述步骤2得到的上清，分批加入层析柱，过滤流出的液体为穿透液 5.以10倍柱床体积的B液，洗涤琼脂糖珠，过滤流出的液体为洗涤液 6.以6倍柱床体积的C液，洗脱蛋白（洗脱的蛋白一般在第一体积和第二体积，第三积仅有很少量。一般第一体积杂蛋白较多，第二体积蛋白较纯）过滤流出的液体为洗脱液 完全按照说明书来做的 后来导师说是不挂住，我就用了8M的尿素，直接加到上述2样品准备的粗酶液里孵育半小时，可是还是不挂住~我用的质粒时老板从外国要过来了，有原始论文，论文里用的是阳离子交换色谱法，导师让我 用NI-NTA亲和层析，研一刚接触试验，有好多不太明白的地方，希望大家授业解惑~~感激不尽~ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有147人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
6楼2016-01-16 19:05:39
2楼2016-01-16 16:23:12
3楼2016-01-16 17:16:28
4楼2016-01-16 17:38:50
