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当归加首乌

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR的结果没有目的片段,换过很多条件。求大神指导! 已有14人参与

第一次用高保真酶很顺利扩出来了大部分基因,可是后面用普通酶就扩不出来了

改变的条件就俩:1、高保真酶换成了普通酶;2、cDNA量加大了,从30ng左右加达到了300ng左右。

现在换了很多退火温度,都不行!条带都在marker最下面一条那。求帮助!!

图是今天跑的,左边是引物、cDNA。右边是扩增产物。

图中分别是引物(<100),cDNA(中间),PCR产物(<100)

PCR的结果没有目的片段,换过很多条件。求大神指导!
1.png
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总是记不起密码~~~
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-15 22:29:03
根据你的描述,高保真酶是可以成功扩增的;
你可以考虑试剂的问题,dNTP 和 Taq酶的问题;
以前遇到很多次dNTP 出问题的情况,并且你的扩增貌似连引物二聚体都没有,估计是dNTP的问题;
可以考虑更换其他批次实验。
9楼2016-01-15 16:18:36
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)

哦,对了,还有就是引物从2ul加到了4ul。
总是记不起密码~~~
2楼2016-01-15 11:19:03
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lifechuteng

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换条件治标不治本,换引物才是王道啊!

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-15 11:21:31
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

没看见高保真酶扩增出来了,按道理Taq的扩增效率是最强的啊~没理由扩不出来……

发自小木虫Android客户端
4楼2016-01-15 11:23:26
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