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当归加首乌

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR的结果没有目的片段,换过很多条件。求大神指导! 已有14人参与

第一次用高保真酶很顺利扩出来了大部分基因,可是后面用普通酶就扩不出来了

改变的条件就俩:1、高保真酶换成了普通酶;2、cDNA量加大了,从30ng左右加达到了300ng左右。

现在换了很多退火温度,都不行!条带都在marker最下面一条那。求帮助!!

图是今天跑的,左边是引物、cDNA。右边是扩增产物。

图中分别是引物(<100),cDNA(中间),PCR产物(<100)

PCR的结果没有目的片段,换过很多条件。求大神指导!
1.png
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总是记不起密码~~~
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Nichole0503

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by jackyoung at 2016-01-15 19:59:30
估计是高GC吧,高保真酶一般对buffer 各种优化过,普通酶不行的话可以试着加入6%的DMSO,看看效果。

好哒!感谢!前面好像也看过这个提议!我尝试一下!

发自小木虫IOS客户端
13楼2016-01-15 20:19:08
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当归加首乌

新虫 (初入文坛)

哦,对了,还有就是引物从2ul加到了4ul。
总是记不起密码~~~
2楼2016-01-15 11:19:03
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lifechuteng

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
换条件治标不治本,换引物才是王道啊!

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-15 11:21:31
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lifechuteng

新虫 (小有名气)

没看见高保真酶扩增出来了,按道理Taq的扩增效率是最强的啊~没理由扩不出来……

发自小木虫Android客户端
4楼2016-01-15 11:23:26
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