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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 原核基因敲除
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921206

新虫 (初入文坛)

[交流] 原核基因敲除 已有3人参与

最近刚开始做原核敲除，对质粒进行PCR后DpnI消除模板，结果会有两条带，暂且命名为上，和DpnI消化产物，对其都回收后发现bp相近，那哪个是消化好的呢？求大神指教，图1左200bp DNA ladder,DpnI消化产物，双酶切。图2左MAKER，DpnI胶回收，酶切回收，上回收

原核基因敲除


原核基因敲除-1


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1楼 2016-01-15 07:52:25
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921206

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by pursuream at 2016-01-15 17:04:29
你问的是质粒构建问题，和敲除无关。
DpnI只是去除模板，跟你产物又无关；位置不同的两条带，回收以后又跑到一起啦？如果是这样，我猜测，上面条带是你PCR产物DNA结合蛋白比如DpnI或别的什么造成，与下面条带没什么 ...

还是谢谢您啦

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10楼2016-01-15 22:42:58
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原海亮

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主对质粒进行PCR是要做扩环点突变么？

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-01-15 09:28:41
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921206

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-01-15 09:28:41
楼主对质粒进行PCR是要做扩环点突变么？

没接触过扩环点突变，用带有NGG序列引物对质粒扩增的，问一下，你做敲除吗

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3楼2016-01-15 12:30:22
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原海亮

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 921206 at 2016-01-15 12:30:22
没接触过扩环点突变，用带有NGG序列引物对质粒扩增的，问一下，你做敲除吗
...

做过敲除，只是不太懂你这些操作和基因敲除的关系，倒和我们经常做的点突变挺像

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
4楼2016-01-15 12:31:53
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