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易农植保

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白电泳求助 已有1人参与

各位大神,最近直接用蛋白loading buffer煮真菌菌丝或者用液氮将菌丝研磨后加入loading buffer煮,离心后取10μl上样跑SDS-PAGE,泳道会越跑越宽,而且很弥散,把旁边正常的纯蛋白泳道挤变形了都,这种情况该怎么解决?先多谢啦
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seeker91

木虫 (文坛精英)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个问题很少见哦,泳带变宽说明蛋白单一,最好就是各一个孔点一个样,如果这个方案不可取的话,那就用loading补傍边的泳道,或者多一些,就是用loading平衡他们,应该就好了。
祝福祝福

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2楼2016-01-13 09:27:46
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易农植保

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by seeker91 at 2016-01-13 09:27:46
这个问题很少见哦,泳带变宽说明蛋白单一,最好就是各一个孔点一个样,如果这个方案不可取的话,那就用loading补傍边的泳道,或者多一些,就是用loading平衡他们,应该就好了。
祝福祝福:tiger2 ...

多谢
3楼2016-01-13 09:48:08
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反应链

新虫 (正式写手)

High salt concentration in these samples. Precipitate and resuspend or Dialyze these samples.

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  • 附件 1 : protein_gel_electrophoresis_tips_and_troubleshooting_guide.pdf
  • 2016-01-13 10:56:46, 154.61 K
4楼2016-01-13 10:56:48
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易农植保

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-13 10:56:48
High salt concentration in these samples. Precipitate and resuspend or Dialyze these samples.

你好,首先谢谢你的回复。我这个样品是直接用蛋白loading buffer去煮菌丝,所有蛋白直接溶解到buffer里面去了,这样导致里面离子浓度很高,电泳条带不好,这种情况好像不太适合透析之类的方法,请问这应该怎么处理呢?谢谢
5楼2016-01-13 11:05:49
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15895812751

新虫 (初入文坛)

6楼2016-01-13 15:31:10
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反应链

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 易农植保 at 2016-01-13 11:05:49
你好,首先谢谢你的回复。我这个样品是直接用蛋白loading buffer去煮菌丝,所有蛋白直接溶解到buffer里面去了,这样导致里面离子浓度很高,电泳条带不好,这种情况好像不太适合透析之类的方法,请问这应该怎么处理 ...

Some samples run as "wide lanes", because of high salt concentration in these samples.

Add trichloroacetic acid (TCA) to 10% (W/V) and incubate for 5 minutes at 4 degrees Celsius. Centrifuge and wash pellet with cold acetone. Resuspend pellet with SDS sample loading buffer in volume desired.

If it dosen't work well, you should decrease voltage by 25-50%.
7楼2016-01-13 16:16:43
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bigcindy

银虫 (小有名气)

8楼2016-01-18 18:56:37
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