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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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易农植保

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白电泳求助 已有1人参与

各位大神，最近直接用蛋白loading buffer煮真菌菌丝或者用液氮将菌丝研磨后加入loading buffer煮，离心后取10μl上样跑SDS-PAGE，泳道会越跑越宽，而且很弥散，把旁边正常的纯蛋白泳道挤变形了都，这种情况该怎么解决？先多谢啦
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1楼 2016-01-13 08:51:03
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反应链

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 易农植保 at 2016-01-13 11:05:49
你好，首先谢谢你的回复。我这个样品是直接用蛋白loading buffer去煮菌丝，所有蛋白直接溶解到buffer里面去了，这样导致里面离子浓度很高，电泳条带不好，这种情况好像不太适合透析之类的方法，请问这应该怎么处理 ...

Some samples run as "wide lanes", because of high salt concentration in these samples.

Add trichloroacetic acid (TCA) to 10% (W/V) and incubate for 5 minutes at 4 degrees Celsius. Centrifuge and wash pellet with cold acetone. Resuspend pellet with SDS sample loading buffer in volume desired.

If it dosen't work well, you should decrease voltage by 25-50%.
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7楼2016-01-13 16:16:43
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seeker91

木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个问题很少见哦，泳带变宽说明蛋白单一，最好就是各一个孔点一个样，如果这个方案不可取的话，那就用loading补傍边的泳道，或者多一些，就是用loading平衡他们，应该就好了。
祝福祝福
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易农植保
2楼2016-01-13 09:27:46
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易农植保

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by seeker91 at 2016-01-13 09:27:46
这个问题很少见哦，泳带变宽说明蛋白单一，最好就是各一个孔点一个样，如果这个方案不可取的话，那就用loading补傍边的泳道，或者多一些，就是用loading平衡他们，应该就好了。
祝福祝福:tiger2 ...

多谢
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3楼2016-01-13 09:48:08
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反应链

新虫 (正式写手)
High salt concentration in these samples. Precipitate and resuspend or Dialyze these samples.
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  • 附件 1 : protein_gel_electrophoresis_tips_and_troubleshooting_guide.pdf
    • 2016-01-13 10:56:46, 154.61 K
4楼2016-01-13 10:56:48
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