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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 酶切问题求助

手里有一个工程菌,好几年前构建的,期间也提过质粒又转到表达菌里(传代次数不清楚了)。最开始做时,酶切后都只有目的基因一个小片段,现在酶切后,700bp下面都会多出一条带,请问一下是什么原因?酶切的条件也没有改变。请问大家这个该怎么办。是什么原因造成的?难道要重新构建合成么,才可以再酶切出只有目的基因一个小片段么?  质粒是pet-3C。双酶是ndeI 和Bham I,marker左边是2000,右边是10000的。500bp下面的是目的蛋白,现在是700bp下面也有片段被切出来。

酶切问题求助
1.jpg
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 疯子J-F at 2016-01-12 11:58:12
你重新转化,鉴定正确以后再提质粒酶切试试看

我有把质粒提出来送出去测序,正确后又转回表达菌里,但是提质粒酶切后还是一样的!
I am not a hero , but I served with heroes!
15楼2016-01-12 13:03:01
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wlt728(金币+1): 谢谢参与
2楼2016-01-12 11:33:35
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wlt728(金币+1): 谢谢参与
5楼2016-01-12 11:47:21
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wlt728(金币+1): 谢谢参与
6楼2016-01-12 11:49:17
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