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wlt728铁杆木虫 (著名写手)
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酶切问题求助
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手里有一个工程菌，好几年前构建的，期间也提过质粒又转到表达菌里（传代次数不清楚了）。最开始做时，酶切后都只有目的基因一个小片段，现在酶切后，700bp下面都会多出一条带，请问一下是什么原因？酶切的条件也没有改变。请问大家这个该怎么办。是什么原因造成的？难道要重新构建合成么，才可以再酶切出只有目的基因一个小片段么？ 质粒是pet-3C。双酶是ndeI 和Bham I，marker左边是2000，右边是10000的。500bp下面的是目的蛋白，现在是700bp下面也有片段被切出来。 1.jpg |
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