应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 16S扩不出来，到底是模板问题还是引物问题？
111/2返回列表12下一页
查看: 1967  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

redrover

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢
1楼 2016-01-11 20:23:41
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redrover

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
2楼2016-01-11 20:27:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redrover

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2016-01-11 20:32:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

安静de执着14

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-13 18:13:24
你好，请问你是指的是16s rDNAPCR扩增吗？我以前做过，因为引物是通用引物，只要有DNA模板都能扩增出来的。
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-11 21:12:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

反应链

新虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-13 18:13:33
Your results have been identified the key problem, which was the DNA sample containing high level of polysaccharides that binding or co-precipitate with DNA. The evidences were 1) positive amplification at low concentration which could reduce the contaminates, 2) highlight strength above the agarose-gel well which was the high level of polysaccharides that binding or co-precipitate with DNA.

Therefore, you can purify your DNA samples using high salt TE protocol below.

1. Add 400 ul of high salt TE (1M NaCl in TE buffer) +2 ul of RNaseA (10mg/mL)
2. Incubate at 37 degrees Celsiu for one hour, mixing from time to time until the pellet dissolves
3. add 2 volume of cold 100% ethanol, put at -20 degree Celsiu for 20 minutes
4. Spin at max speed for 15 minutes
5. Wash pellet with 1ml of cold 75% ethanol
6. Spin at max speed for 5 minutes
7. Repeat wash
8. Dry pellet and resuspend in 100 ul of TE (or more, as you prefer)

Or you can re-extract your DNA samples with 3% CTAB DNA extraction protocol, which separates high quality DNA in our labs.
16S扩不出来，到底是模板问题还是引物问题？
3% CTAB DNA Extraction Protocol.jpg
赞一下 回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 3%_CTAB_DNA_Extraction_Protocol.pdf
    • 2016-01-11 21:42:18, 50.16 K
5楼2016-01-11 21:42:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redrover

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2016-01-11 22:13:05
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redrover

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2016-01-11 22:32:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-13 18:13:59
DNA应该不是影响因素，怀疑引物问题，重合就好了，一对才20多块钱，你这半天功夫不值得。
赞一下 回复此楼
有你真好
8楼2016-01-13 14:57:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)
为什么每次跑marker都是歪的呢
赞一下 回复此楼
生物你好
9楼2016-01-13 15:31:37
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

redrover

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2016-01-14 18:18:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 redrover 的主题更新
111/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 11/550 2026-08-10 17:09 by 六两废铜
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +4 布布和一二 2026-08-10 4/200 2026-08-10 14:50 by 医学老男孩
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭