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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切产物转化，长满了菌
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

[交流] 酶切产物转化，长满了菌

本人用平末端酶酶切完以后，直接用1/10NaAC,2倍体积的乙醇，70%的乙醇处理，最后用洗脱液溶解。我将获得产物取2.5uL转入DH5α中，结果在相应抗性的LB板上长满了菌，我觉得很费解。还请知道的虫友不吝赐教，谢谢啦！
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1楼 2016-01-10 23:07:40
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xiangshengyan

木虫 (正式写手)
★
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not completely digested
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ANNA&KEVIN
3楼2016-01-11 01:50:15
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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tianyufeiyu: 金币+2 2016-01-14 16:20:31
tianyufeiyu: 金币+3 2016-01-14 16:25:13
引用回帖:
4楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2016-01-11 08:28:37
我用胶回收，再转化，板子上只长了几个菌
...

胶回收后浓度应该是有变化的。长出菌落的原因可能有：E.coli细胞通过某种DNA修复机制将线性化质粒环化，毕竟细胞经过了生理期；还有，可能是你没有完全切开，但是你说你用胶回收结果还是有菌落，这个实验应该是排除了这个可能性；另外，就是污染问题，可能发生在你的DH5a上，建议换一种大肠杆菌试一试。以上都是个人见解。
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9楼2016-01-11 11:55:25
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
★
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个人觉得是因为你转入了E.coli后，细胞内部的修复机制引起的。

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2楼2016-01-11 00:42:49
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evil丶zero at 2016-01-11 00:42:49
个人觉得是因为你转入了E.coli后，细胞内部的修复机制引起的。

我用胶回收，再转化，板子上只长了几个菌

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4楼2016-01-11 08:28:37
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seeker91

木虫 (文坛精英)
★ ★ ★ ★
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tianyufeiyu: 金币+2 2016-01-14 16:25:24
tianyufeiyu: 金币+1 2016-02-19 16:17:50
很明显你用的试剂出问题了呗，大多数情况是DH5a有问题哦
祝福祝福
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5楼2016-01-11 09:12:41
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gander
c
6楼2016-01-11 09:24:29
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by seeker91 at 2016-01-11 09:12:41
很明显你用的试剂出问题了呗，大多数情况是DH5a有问题哦
祝福祝福

我用同样的酶酶切，然后胶回收，再将酶切产物转入同样的感受态，板子上只长了几个菌，这又是为什么？

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7楼2016-01-11 09:42:59
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反应链

新虫 (正式写手)
★
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No ligation needed? Did you transferred the linear DNA into competent E. coli?
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8楼2016-01-11 11:34:00
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-11 11:34:00
No ligation needed? Did you transferred the linear DNA into competent E. coli?

我是将线性载体直接转入感受态细胞的

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10楼2016-01-11 18:33:26
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