应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切产物转化，长满了菌
131/2返回列表12下一页
查看: 1673  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

[交流] 酶切产物转化，长满了菌

本人用平末端酶酶切完以后，直接用1/10NaAC,2倍体积的乙醇，70%的乙醇处理，最后用洗脱液溶解。我将获得产物取2.5uL转入DH5α中，结果在相应抗性的LB板上长满了菌，我觉得很费解。还请知道的虫友不吝赐教，谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-10 23:07:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiangshengyan

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
not completely digested
赞一下(1人) 回复此楼
ANNA&KEVIN
3楼2016-01-11 01:50:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evil丶zero

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
tianyufeiyu: 金币+2 2016-01-14 16:20:31
tianyufeiyu: 金币+3 2016-01-14 16:25:13
引用回帖:
4楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2016-01-11 08:28:37
我用胶回收，再转化，板子上只长了几个菌
...

胶回收后浓度应该是有变化的。长出菌落的原因可能有：E.coli细胞通过某种DNA修复机制将线性化质粒环化，毕竟细胞经过了生理期；还有，可能是你没有完全切开，但是你说你用胶回收结果还是有菌落，这个实验应该是排除了这个可能性；另外，就是污染问题，可能发生在你的DH5a上，建议换一种大肠杆菌试一试。以上都是个人见解。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2016-01-11 11:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

evil丶zero

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
个人觉得是因为你转入了E.coli后，细胞内部的修复机制引起的。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-11 00:42:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evil丶zero at 2016-01-11 00:42:49
个人觉得是因为你转入了E.coli后，细胞内部的修复机制引起的。

我用胶回收，再转化，板子上只长了几个菌

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-11 08:28:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seeker91

木虫 (文坛精英)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
tianyufeiyu: 金币+2 2016-01-14 16:25:24
tianyufeiyu: 金币+1 2016-02-19 16:17:50
很明显你用的试剂出问题了呗，大多数情况是DH5a有问题哦
祝福祝福
赞一下 回复此楼
5楼2016-01-11 09:12:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gander
c
6楼2016-01-11 09:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by seeker91 at 2016-01-11 09:12:41
很明显你用的试剂出问题了呗，大多数情况是DH5a有问题哦
祝福祝福

我用同样的酶酶切，然后胶回收，再将酶切产物转入同样的感受态，板子上只长了几个菌，这又是为什么？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-01-11 09:42:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

反应链

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
No ligation needed? Did you transferred the linear DNA into competent E. coli?
赞一下 回复此楼
8楼2016-01-11 11:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-11 11:34:00
No ligation needed? Did you transferred the linear DNA into competent E. coli?

我是将线性载体直接转入感受态细胞的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-01-11 18:33:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tianyufeiyu 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 能否申诉？ +4 echo8914667 2026-08-30 5/250 2026-08-30 21:11 by echo8914667
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 18/900 2026-08-30 16:47 by 黄鸟于飞Chao
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭