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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

[交流] 酶切产物转化,长满了菌

本人用平末端酶酶切完以后,直接用1/10NaAC,2倍体积的乙醇,70%的乙醇处理,最后用洗脱液溶解。我将获得产物取2.5uL转入DH5α中,结果在相应抗性的LB板上长满了菌,我觉得很费解。还请知道的虫友不吝赐教,谢谢啦!
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xiangshengyan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
not completely digested
ANNA&KEVIN
3楼2016-01-11 01:50:15
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evil丶zero

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
tianyufeiyu: 金币+2 2016-01-14 16:20:31
tianyufeiyu: 金币+3 2016-01-14 16:25:13
引用回帖:
4楼: Originally posted by tianyufeiyu at 2016-01-11 08:28:37
我用胶回收,再转化,板子上只长了几个菌
...

胶回收后浓度应该是有变化的。长出菌落的原因可能有:E.coli细胞通过某种DNA修复机制将线性化质粒环化,毕竟细胞经过了生理期;还有,可能是你没有完全切开,但是你说你用胶回收结果还是有菌落,这个实验应该是排除了这个可能性;另外,就是污染问题,可能发生在你的DH5a上,建议换一种大肠杆菌试一试。以上都是个人见解。
9楼2016-01-11 11:55:25
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普通回帖

evil丶zero

金虫 (小有名气)


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个人觉得是因为你转入了E.coli后,细胞内部的修复机制引起的。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-11 00:42:49
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by evil丶zero at 2016-01-11 00:42:49
个人觉得是因为你转入了E.coli后,细胞内部的修复机制引起的。

我用胶回收,再转化,板子上只长了几个菌

发自小木虫Android客户端
4楼2016-01-11 08:28:37
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seeker91

木虫 (文坛精英)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
tianyufeiyu: 金币+2 2016-01-14 16:25:24
tianyufeiyu: 金币+1 2016-02-19 16:17:50
很明显你用的试剂出问题了呗,大多数情况是DH5a有问题哦
祝福祝福
5楼2016-01-11 09:12:41
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c
6楼2016-01-11 09:24:29
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by seeker91 at 2016-01-11 09:12:41
很明显你用的试剂出问题了呗,大多数情况是DH5a有问题哦
祝福祝福

我用同样的酶酶切,然后胶回收,再将酶切产物转入同样的感受态,板子上只长了几个菌,这又是为什么?

发自小木虫Android客户端
7楼2016-01-11 09:42:59
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反应链

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
No ligation needed? Did you transferred the linear DNA into competent E. coli?
8楼2016-01-11 11:34:00
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tianyufeiyu

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-11 11:34:00
No ligation needed? Did you transferred the linear DNA into competent E. coli?

我是将线性载体直接转入感受态细胞的

发自小木虫Android客户端
10楼2016-01-11 18:33:26
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