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津枫Z宁

新虫 (小有名气)

pH值是不是有点高了,并且你的梯度有机相最高到了60%,要考虑一下这个比例条件下的混合溶液的pH值。

发自小木虫IOS客户端
11楼2016-01-11 13:40:06
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月光晒谷

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这款柱子PH范围比较宽,流动相这块应该没问题.况且你在前一天使用还是没有问题的.你可以跟踪查看一下你前几次检测图谱的塔板数和对称因子,是否一直在下降,如果在下降 ,可能流动相或者样品对柱子有影响.如果没有下降,可能你的柱子受到别的方面的影响,比如不小心摔了.建议你3 个做法.
1.60%乙腈做流动相,一定浓度的甲苯或者萘作为供试品,254nm,1.0ml/min 柱温30测试柱效,看看塔板数与对称因子。新柱子应该不会低于20000,
2。你可以把柱子按照说明书再生一下,再生完毕在测试柱效
3。你可以将柱子反过来用,看看效果如何,这是最下策。如果反用没问题,那可能是入口筛板有问题。洗一下或者换一个。
12楼2016-01-11 13:59:14
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
进样量太大、磷酸盐浓度也大,其次,冲的时间不够,磷酸盐的话至少两小时
13楼2016-01-11 14:38:06
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hubeilengfei

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by klicking at 2016-01-10 08:39:14
该色谱柱pH范围应该是1-12,因此pH应该不是问题。
对于楼主的描述有两个小疑问:一是为何进样体积是40ul,现在进样体积一般是10或20ul,通常选择10ul,40ul 0.5 mg/ml相当于10 ul 2.0 mg/ml,进样浓度是否太高?
...

谢谢你的回复,当时选择pH7.5主要是为了改善主峰拖尾,越偏酸性,主峰越拖尾
有几个已知杂质响应较低,所以才浓度加得较高,现在已经换了波长,样品进样量降低了一半,希望柱子能多坚持
14楼2016-01-11 18:46:00
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by hubeilengfei at 2016-01-11 18:46:00
谢谢你的回复,当时选择pH7.5主要是为了改善主峰拖尾,越偏酸性,主峰越拖尾
有几个已知杂质响应较低,所以才浓度加得较高,现在已经换了波长,样品进样量降低了一半,希望柱子能多坚持...

改善拖尾建议流动相中加入三乙胺试试或换醋酸铵流动相看看。
归零
15楼2016-01-11 18:50:09
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Greifvogel

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
固定相上的封尾基团(三甲基硅基)水解了,这是不可逆的损伤,所以才拖尾
MeineEhreheisstTreue
16楼2016-01-11 20:05:19
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michaelye1800

木虫 (正式写手)

请问你的溶剂是什么?会不会有溶剂效应

发自小木虫Android客户端
17楼2016-01-11 22:27:16
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忍冬1018

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

该色谱柱虽然pH范围较宽,但对于偏碱性流动相对色谱柱的损坏还是很明显的。
1个多月应该你一直在使用,使用完毕后色谱柱的冲洗维护时间不够,建议购买2根交替使用,但一定冲洗好,尤其将盐置换完全,另外也要多用高有机相冲洗时间长些,因为进样量大,有可能一些难洗脱的杂质会残留在色谱柱上,时间久了也会损坏色谱柱;如果觉得购买2支觉得价格高,也可以加上保护住,定期更换,对你的色谱柱也可起到保护和延长使用寿命的作用。
另外配制的样品记得进行滤膜过滤。
一点建议,希望对你有点帮助。
18楼2016-01-13 09:03:43
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巫女子佩

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

哈哈哈哈原谅我不厚道,你这流动相就是纯粹的烧柱子换结果的思路啊,无机盐+有机相的流动相组合超容易析出盐,不仅是柱子,顺便查看一下你的泵和流路是否还安好吧
如果没有别的可更换的流动相的话,洗泵流路要一直开着,勤更换洗泵液。柱子的话,每次用完用99%的水小流速过夜什么的,然后再换成保护液存放吧。如果时间允许最好每一针做完之后用99%的水冲几个柱体积吧。
19楼2016-01-13 11:04:57
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

样品为游离碱,应该是样品的碱性又在色谱柱上保留造成硅胶水解,硅烷断裂,从而造成柱效降低,建议做完碱性样品冲洗色谱柱时水和有机相加0.1%的TFA,可以延长色谱柱寿命。之前我遇到过同样的问题,加TFA得到解决
悲催的研发!
20楼2016-01-13 17:28:21
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