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hubeilengfei金虫 (正式写手)
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新买的waters Xbridge C18色谱柱用了一个月就坏了，大家帮忙分析下 已有15人参与
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色谱柱是waters Xbridge C18（4.6mm*250mm,5um）用来分析化药的，样品为游离碱，浓度为0.5mg/ml，进样量40ul 流动相A为0.01mol/L的磷酸氢二钾（磷酸调节pH为7.5），流动相B为乙腈，梯度如下： 时间（min） 0 5 30 50 51 60 流动相A（%）95 85 75 40 95 95 柱温为30度 色谱柱用了差不多1个月就严重拖尾了，冲了几天也没冲好，就这样五六千就没了，郁闷  在用的过程中柱压一直未升高，每天用完就冲柱了，柱子坏的时候，前一天样品出峰均很正常，没有拖尾的迹象， 求各位帮忙分析下，不胜感激！ |
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这款柱子PH范围比较宽,流动相这块应该没问题.况且你在前一天使用还是没有问题的.你可以跟踪查看一下你前几次检测图谱的塔板数和对称因子,是否一直在下降,如果在下降 ,可能流动相或者样品对柱子有影响.如果没有下降,可能你的柱子受到别的方面的影响,比如不小心摔了.建议你3 个做法. 1.60%乙腈做流动相,一定浓度的甲苯或者萘作为供试品,254nm,1.0ml/min 柱温30测试柱效，看看塔板数与对称因子。新柱子应该不会低于20000， 2。你可以把柱子按照说明书再生一下，再生完毕在测试柱效 3。你可以将柱子反过来用，看看效果如何，这是最下策。如果反用没问题，那可能是入口筛板有问题。洗一下或者换一个。 |
12楼2016-01-11 13:59:14
ruijieyang
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hubeilengfei: 金币+10, ★有帮助, 就是担心伤柱子才把盐浓度降的较低 2016-01-10 08:30:55
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盐浓度低，方法不合适 发自小木虫Android客户端 |
2楼2016-01-10 06:57:57
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盐浓度低也能毁柱子？？？？目前按照你提供的信息，原因可能有两种：1.是流动相的pH值，过高，尝试过酸性条件么？2，样品特性。样品进样浓度能降低么，样品本身对柱子有伤害。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-01-10 07:17:42
klicking
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该色谱柱pH范围应该是1-12，因此pH应该不是问题。 对于楼主的描述有两个小疑问：一是为何进样体积是40ul，现在进样体积一般是10或20ul，通常选择10ul，40ul 0.5 mg/ml相当于10 ul 2.0 mg/ml，进样浓度是否太高？ 另外是磷酸缓冲盐的使用中梯度末乙腈比例是否太高，我们一个项目用到磷酸缓冲盐当超过50%的乙腈时特别容易导致色谱柱堵掉，也是非常伤色谱柱的，还有磷酸盐流动相容易长菌，流动相建议现配现用。 建议色谱柱反过来接看看是否有改善！ （还有游离碱pKa是多少？流动相pH怎么会选7.5） |
4楼2016-01-10 08:39:14
30