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Yvaine830

新虫 (初入文坛)

[求助] 使用氯化苄法提取DNA的若干问题

求助,我想用氯化苄法提取真菌里的dna,但是提到加异丙醇产生絮状沉淀这一步时我个人觉得没有沉淀产生,
1.请问絮状沉淀是什么颜色的?是肉眼可见的吗?我做的就是分了层,下层是像油一样的介质,但没有看到沉淀,请问这是不是压根就没提出来呢?因为电泳检测也没有。
2.我们最后加的是提细菌dna试剂盒里的C6试剂,是不是只能加TE啊
谢谢大家

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Yvaine830

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-07 12:01:55
Why not using the CTAB Method?

3% CTAB DNA extraction protocol http://www.zoology.ubc.ca/~rieseberg/RiesebergResources/wp-content/uploads/2013/03/Sunflower-CTAB-DNA-extraction-protocol-v1.2.pdf...

老师要求我们用这种方法 我就想问问为什么会这样 感觉是提出dna了 因为把那个油状物加到琼脂糖里它会亮 就是不溶于染料 也不往下跑

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3楼2016-01-08 14:00:48
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反应链

新虫 (正式写手)

Why not using the CTAB Method?

3% CTAB DNA extraction protocol http://www.zoology.ubc.ca/~riese ... n-protocol-v1.2.pdf
2楼2016-01-07 12:01:55
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反应链

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Yvaine830 at 2016-01-08 14:00:48
老师要求我们用这种方法 我就想问问为什么会这样 感觉是提出dna了 因为把那个油状物加到琼脂糖里它会亮 就是不溶于染料 也不往下跑
...

Your DNA samples are rich in sticky compounds. You should wash the homogenate with CTAB-free buffer for three or four times, until the supernatant is not viscous.

Please refer to this article "Zeng J, Zou Y P, Bai J Y, et al. Preparation of total DNA from ‘recalcitrant plant taxa’[J]. Acta Botanica Sinica, 2002, 44(6): 694-697."

"The DNA is in a tight tangle with polysaccharides. This tangle of DNA and polysaccharides is very difficult to separte, which has make them too sticking to be dissolved in water or TE, and it is not even possible to load such DNA samples into the electrophoresis well. "

Therefore, your protocol is not suitable for the plant total DNA extraction. Give you a advise, use the 3% CTAB DNA extraction protocol instead.
4楼2016-01-08 15:14:02
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