24小时热门版块排行榜    

查看: 547  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

liupeng5182

金虫 (正式写手)

教授


[交流] 请大家帮我分析下细菌核酸抽提的问题吧,都提了5次了



这幅图片是我提的核酸的电泳条带。
方法是
1 离心过的样品用buffer重新混匀
2 加入SDS,最终浓度为1%,65℃裂解30min
3 加入等体积的酚氯仿异戊醇,轻颠混匀,12000离心10min
4 取水相,加入等体积的氯仿异戊醇,轻颠混匀12000离心10min
5 取水相加+0.1倍体积的NaAc(3M),加入2倍体积预冷的乙醇,轻颠混匀。
6 13000离心30min,弃上清,70%乙醇洗涤
7 干燥后用TE溶解。

请大家帮我分析下前面的亮带是什么。我需要的目的条带应该是红线标记的地方的,为什么条带这么弱?是不是第二步有问题?DNA和蛋白质没分离,导致离心时DNA也沉淀了。
都提了5次了,每次都是这样的结果,大*贵的意见。

[ Last edited by liupeng5182 on 2008-9-28 at 08:47 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

菌名也不说,G+还是G-啊?应该是前者的可能性较大,同意楼上的。如果是 古菌的话,那么你最好液氮 冻融。


   DNA和蛋白质没分离,导致离心时DNA也沉淀了。
至于你说的这个就没有道理了
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2008-09-28 11:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

wh7690703

木虫 (正式写手)

目的条带弱,提取的DNA不多,可能破壁不彻底,加点溶菌酶或蛋白酶K试试
有没有加RNAase A?
2楼2008-09-28 11:08:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sumertansy

铜虫 (小有名气)

RNA啊
同意上面的,破壁不好
3楼2008-09-28 11:40:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liupeng5182

金虫 (正式写手)

教授


谢谢各位,这个应该是G-,之前我师兄提过一次,用16srDNA做过鉴定,差不多都是假单胞菌。没有用RNase A,倒是加过一次蛋白酶K,放70度的水浴里10min,但是效果也不理想。溶菌酶主要是对革兰氏阳性菌有作用吧,所以也没用。
5楼2008-09-28 14:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +3 chengyan1220 2026-08-21 3/150 2026-08-21 12:11 by llionlee007
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 18/900 2026-08-21 11:53 by wuchongjun
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
信息提示
请填处理意见