应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请大家帮我分析下细菌核酸抽提的问题吧，都提了5次了
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 499  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

liupeng5182

金虫 (正式写手)

教授

[交流] 请大家帮我分析下细菌核酸抽提的问题吧，都提了5次了



这幅图片是我提的核酸的电泳条带。
方法是
1 离心过的样品用buffer重新混匀
2 加入SDS，最终浓度为1%，65℃裂解30min
3 加入等体积的酚氯仿异戊醇，轻颠混匀，12000离心10min
4 取水相，加入等体积的氯仿异戊醇，轻颠混匀12000离心10min
5 取水相加+0.1倍体积的NaAc（3M），加入2倍体积预冷的乙醇，轻颠混匀。
6 13000离心30min，弃上清，70%乙醇洗涤
7 干燥后用TE溶解。

请大家帮我分析下前面的亮带是什么。我需要的目的条带应该是红线标记的地方的，为什么条带这么弱？是不是第二步有问题？DNA和蛋白质没分离，导致离心时DNA也沉淀了。
都提了5次了，每次都是这样的结果，大*贵的意见。

[ Last edited by liupeng5182 on 2008-9-28 at 08:47 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-09-28 08:44:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
目的条带弱，提取的DNA不多，可能破壁不彻底，加点溶菌酶或蛋白酶K试试
有没有加RNAase A?
赞一下 回复此楼
2楼2008-09-28 11:08:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sumertansy

铜虫 (小有名气)
RNA啊
同意上面的，破壁不好
赞一下 回复此楼
3楼2008-09-28 11:40:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
菌名也不说，G+还是G-啊？应该是前者的可能性较大，同意楼上的。如果是 古菌的话，那么你最好液氮 冻融。


   DNA和蛋白质没分离，导致离心时DNA也沉淀了。
至于你说的这个就没有道理了
赞一下 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2008-09-28 11:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liupeng5182

金虫 (正式写手)

教授
谢谢各位，这个应该是G-，之前我师兄提过一次，用16srDNA做过鉴定，差不多都是假单胞菌。没有用RNase A，倒是加过一次蛋白酶K，放70度的水浴里10min，但是效果也不理想。溶菌酶主要是对革兰氏阳性菌有作用吧，所以也没用。
赞一下 回复此楼
5楼2008-09-28 14:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)
70度水浴的时候盛提取液最好是用玻璃管，不要用塑料离心管
塑料管导热性不是很好，可能馆内和关外温度不一致
赞一下 回复此楼
6楼2008-09-28 14:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
引用回帖:
Originally posted by liupeng5182 at 2008-9-28 14:27:
谢谢各位，这个应该是G-，之前我师兄提过一次，用16srDNA做过鉴定，差不多都是假单胞菌。没有用RNase A，倒是加过一次蛋白酶K，放70度的水浴里10min，但是效果也不理想。溶菌酶主要是对革兰氏阳性菌有作用吧，所以 ...

溶菌酶不是主要对革兰氏阳性菌有作用，是对阴和阳性菌都有作用，不过是阴性菌的细胞壁比较薄，好破。所以一般不用加就能取得比较好的效果。
赞一下 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
7楼2008-09-28 17:20:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liupeng5182 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-27 6/300 2026-03-27 12:49 by lature00
[考研] 274求调剂 +15 顾九笙要谦虚 2026-03-24 21/1050 2026-03-27 12:20 by 3Strings
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +4 倾____萧 2026-03-27 5/250 2026-03-27 11:52 by zhshch
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 8/400 2026-03-27 11:24 by 丹青奶盖
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-27 07:58 by chemisry
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +3 IceGuo 2026-03-26 4/200 2026-03-27 05:35 by user003
[考研] 341求调剂 +7 青柠檬1 2026-03-26 7/350 2026-03-27 00:19 by wxiongid
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 315分求调剂 +5 26考研上岸版26 2026-03-26 5/250 2026-03-26 12:11 by laoshidan
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 求b区院校调剂 +4 周56 2026-03-24 5/250 2026-03-25 17:12 by yishunmin
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭