24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 503  |  回复: 6
当前主题已经存档。

liupeng5182

金虫 (正式写手)

教授


[交流] 请大家帮我分析下细菌核酸抽提的问题吧,都提了5次了



这幅图片是我提的核酸的电泳条带。
方法是
1 离心过的样品用buffer重新混匀
2 加入SDS,最终浓度为1%,65℃裂解30min
3 加入等体积的酚氯仿异戊醇,轻颠混匀,12000离心10min
4 取水相,加入等体积的氯仿异戊醇,轻颠混匀12000离心10min
5 取水相加+0.1倍体积的NaAc(3M),加入2倍体积预冷的乙醇,轻颠混匀。
6 13000离心30min,弃上清,70%乙醇洗涤
7 干燥后用TE溶解。

请大家帮我分析下前面的亮带是什么。我需要的目的条带应该是红线标记的地方的,为什么条带这么弱?是不是第二步有问题?DNA和蛋白质没分离,导致离心时DNA也沉淀了。
都提了5次了,每次都是这样的结果,大*贵的意见。

[ Last edited by liupeng5182 on 2008-9-28 at 08:47 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)

目的条带弱,提取的DNA不多,可能破壁不彻底,加点溶菌酶或蛋白酶K试试
有没有加RNAase A?
2楼2008-09-28 11:08:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sumertansy

铜虫 (小有名气)

RNA啊
同意上面的,破壁不好
3楼2008-09-28 11:40:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

菌名也不说,G+还是G-啊?应该是前者的可能性较大,同意楼上的。如果是 古菌的话,那么你最好液氮 冻融。


   DNA和蛋白质没分离,导致离心时DNA也沉淀了。
至于你说的这个就没有道理了
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
4楼2008-09-28 11:52:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liupeng5182

金虫 (正式写手)

教授


谢谢各位,这个应该是G-,之前我师兄提过一次,用16srDNA做过鉴定,差不多都是假单胞菌。没有用RNase A,倒是加过一次蛋白酶K,放70度的水浴里10min,但是效果也不理想。溶菌酶主要是对革兰氏阳性菌有作用吧,所以也没用。
5楼2008-09-28 14:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)

70度水浴的时候盛提取液最好是用玻璃管,不要用塑料离心管
塑料管导热性不是很好,可能馆内和关外温度不一致
6楼2008-09-28 14:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

引用回帖:
Originally posted by liupeng5182 at 2008-9-28 14:27:
谢谢各位,这个应该是G-,之前我师兄提过一次,用16srDNA做过鉴定,差不多都是假单胞菌。没有用RNase A,倒是加过一次蛋白酶K,放70度的水浴里10min,但是效果也不理想。溶菌酶主要是对革兰氏阳性菌有作用吧,所以 ...

溶菌酶不是主要对革兰氏阳性菌有作用,是对阴和阳性菌都有作用,不过是阴性菌的细胞壁比较薄,好破。所以一般不用加就能取得比较好的效果。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
7楼2008-09-28 17:20:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liupeng5182 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +6 新时代材料 2026-03-27 6/300 2026-03-27 16:19 by 不吃魚的貓
[考研] 化学调剂 +3 爱吃番茄的旭 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:43 by shangxh
[考研] 265求调剂 +4 小木虫085600 2026-03-27 4/200 2026-03-27 14:26 by laoshidan
[考研] 329求调剂 +4 星野? 2026-03-26 4/200 2026-03-27 12:00 by 不吃魚的貓
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 311求调剂 +5 勇敢的小吴 2026-03-20 5/250 2026-03-27 11:07 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:17 by guoweigw
[考研] 343求调剂 +4 赠我一本书 2026-03-23 4/200 2026-03-27 00:40 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 279求调剂 +6 红衣隐官 2026-03-21 6/300 2026-03-26 18:32 by 不吃魚的貓
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境,总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
信息提示
请填处理意见