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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白表达的时候养菌不成功
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达的时候养菌不成功 已有5人参与

如题，我想表达几组重组蛋白，构建重组质粒后转化Trans1-T1，然后养起来提取质粒测序都很顺利，测序结果也对，但是再转化BL21和Trans B来表达蛋白时却遇到了麻烦，平板上都长出来了，看着也很正常，但是挑菌放到液体培养基就不行了，一晚上过夜都长不出来，培养基还是很清，好几个重组蛋白都是这样，我想问有没有知道这是什么原因的大神啊，帮帮我，多谢啦。
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1楼 2016-01-05 09:43:18
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刘氏响声丸

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 曼陀罗的祈祷 at 2016-01-05 13:39:02
还没做到这一步，才酶切连接这一块，连了两次都不成功，已接近崩溃

连接做了两个多月才成功的路过，。。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2016-01-05 16:53:39
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
请大家帮帮忙吧，多谢
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2楼2016-01-05 09:43:38
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Mr.四娃(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:22:55
Mr.四娃: 金币+15, ★★★很有帮助 2016-01-07 08:50:31
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态，或者质粒重新转化提取一次。
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3楼2016-01-05 09:48:03
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2016-01-05 09:48:03
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态，或者质粒重新转化提取一次。

谢谢哥们啦。但是我好几种蛋白都是这样，质粒转化Trans1-T1就很好，一转化表达用的BL21就遇到问题了，而且BL21是平板上长得挺好，一接种到液体里面就不怎么长了，这很困惑啊
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4楼2016-01-05 09:59:01
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