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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白表达的时候养菌不成功
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达的时候养菌不成功 已有5人参与

如题，我想表达几组重组蛋白，构建重组质粒后转化Trans1-T1，然后养起来提取质粒测序都很顺利，测序结果也对，但是再转化BL21和Trans B来表达蛋白时却遇到了麻烦，平板上都长出来了，看着也很正常，但是挑菌放到液体培养基就不行了，一晚上过夜都长不出来，培养基还是很清，好几个重组蛋白都是这样，我想问有没有知道这是什么原因的大神啊，帮帮我，多谢啦。
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1楼 2016-01-05 09:43:18
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Mr.四娃(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:22:55
Mr.四娃: 金币+15, ★★★很有帮助 2016-01-07 08:50:31
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态，或者质粒重新转化提取一次。
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3楼2016-01-05 09:48:03
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 刘氏响声丸 at 2016-01-05 16:53:39
连接做了两个多月才成功的路过，。。。。
...

不是吧，我还想一个月之内做出来，蛋白表达出来，顺便纯化呢
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
13楼2016-01-06 11:31:39
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普通回帖

Mr.四娃

金虫 (小有名气)
请大家帮帮忙吧，多谢
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2楼2016-01-05 09:43:38
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2016-01-05 09:48:03
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态，或者质粒重新转化提取一次。

谢谢哥们啦。但是我好几种蛋白都是这样，质粒转化Trans1-T1就很好，一转化表达用的BL21就遇到问题了，而且BL21是平板上长得挺好，一接种到液体里面就不怎么长了，这很困惑啊
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4楼2016-01-05 09:59:01
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qinqqjiajia

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
培养基的抗性添加的正确吗？是不是里面含有抑制重组质粒的试剂？
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5楼2016-01-05 10:09:44
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qinqqjiajia at 2016-01-05 10:09:44
培养基的抗性添加的正确吗？是不是里面含有抑制重组质粒的试剂？

肯定正确，我的培养基只加了氨苄，而且养Trans1-T1就可以，养表达的菌就不行了，真是愁死了
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6楼2016-01-05 10:23:58
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Mr.四娃 at 2016-01-05 09:59:01
谢谢哥们啦。但是我好几种蛋白都是这样，质粒转化Trans1-T1就很好，一转化表达用的BL21就遇到问题了，而且BL21是平板上长得挺好，一接种到液体里面就不怎么长了，这很困惑啊...

如果真是噬菌体污染，一般在平板上长大没事，偶见噬菌斑，一转到液体培养就不行了。我以前很经常碰到。
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7楼2016-01-05 13:00:23
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-01-05 19:23:15
还没做到这一步，才酶切连接这一块，连了两次都不成功，已接近崩溃
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
8楼2016-01-05 13:39:02
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by uulovelyuu at 2016-01-05 13:00:23
如果真是噬菌体污染，一般在平板上长大没事，偶见噬菌斑，一转到液体培养就不行了。我以前很经常碰到。...

我们现在用的是全式金的表达感受态细胞，BL21和TransB都是，但是也都是买了不长时间，真的可能是噬菌体污染了吗，哥们
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9楼2016-01-05 13:50:13
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
Mr.四娃(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:24:09
引用回帖:
9楼: Originally posted by Mr.四娃 at 2016-01-05 13:50:13
我们现在用的是全式金的表达感受态细胞，BL21和TransB都是，但是也都是买了不长时间，真的可能是噬菌体污染了吗，哥们...

不好说。建议你把所用到的器材，培养基啥的全部用新灭的做一次试试，超净台也多紫外一会。噬菌体污染这事，真不是特别好排除哪步进去的。我们当年都不追究原因，赶紧改进后尝试下一次是王道。
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10楼2016-01-05 16:11:40
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