应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 蛋白表达的时候养菌不成功
171/2返回列表12下一页
查看: 1852  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Mr.四娃

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达的时候养菌不成功 已有5人参与

如题，我想表达几组重组蛋白，构建重组质粒后转化Trans1-T1，然后养起来提取质粒测序都很顺利，测序结果也对，但是再转化BL21和Trans B来表达蛋白时却遇到了麻烦，平板上都长出来了，看着也很正常，但是挑菌放到液体培养基就不行了，一晚上过夜都长不出来，培养基还是很清，好几个重组蛋白都是这样，我想问有没有知道这是什么原因的大神啊，帮帮我，多谢啦。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-01-05 09:43:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Mr.四娃(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:22:55
Mr.四娃: 金币+15, ★★★很有帮助 2016-01-07 08:50:31
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态，或者质粒重新转化提取一次。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-01-05 09:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 刘氏响声丸 at 2016-01-05 16:53:39
连接做了两个多月才成功的路过，。。。。
...

不是吧，我还想一个月之内做出来，蛋白表达出来，顺便纯化呢
赞一下(1人) 回复此楼
想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
13楼2016-01-06 11:31:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Mr.四娃

金虫 (小有名气)
请大家帮帮忙吧，多谢
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-05 09:43:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2016-01-05 09:48:03
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态，或者质粒重新转化提取一次。

谢谢哥们啦。但是我好几种蛋白都是这样，质粒转化Trans1-T1就很好，一转化表达用的BL21就遇到问题了，而且BL21是平板上长得挺好，一接种到液体里面就不怎么长了，这很困惑啊
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-05 09:59:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qinqqjiajia

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
培养基的抗性添加的正确吗？是不是里面含有抑制重组质粒的试剂？
赞一下 回复此楼
5楼2016-01-05 10:09:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by qinqqjiajia at 2016-01-05 10:09:44
培养基的抗性添加的正确吗？是不是里面含有抑制重组质粒的试剂？

肯定正确，我的培养基只加了氨苄，而且养Trans1-T1就可以，养表达的菌就不行了，真是愁死了
赞一下 回复此楼
6楼2016-01-05 10:23:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Mr.四娃 at 2016-01-05 09:59:01
谢谢哥们啦。但是我好几种蛋白都是这样，质粒转化Trans1-T1就很好，一转化表达用的BL21就遇到问题了，而且BL21是平板上长得挺好，一接种到液体里面就不怎么长了，这很困惑啊...

如果真是噬菌体污染，一般在平板上长大没事，偶见噬菌斑，一转到液体培养就不行了。我以前很经常碰到。
赞一下 回复此楼
7楼2016-01-05 13:00:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-01-05 19:23:15
还没做到这一步，才酶切连接这一块，连了两次都不成功，已接近崩溃
赞一下 回复此楼
想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
8楼2016-01-05 13:39:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mr.四娃

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by uulovelyuu at 2016-01-05 13:00:23
如果真是噬菌体污染，一般在平板上长大没事，偶见噬菌斑，一转到液体培养就不行了。我以前很经常碰到。...

我们现在用的是全式金的表达感受态细胞，BL21和TransB都是，但是也都是买了不长时间，真的可能是噬菌体污染了吗，哥们
赞一下 回复此楼
9楼2016-01-05 13:50:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
Mr.四娃(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:24:09
引用回帖:
9楼: Originally posted by Mr.四娃 at 2016-01-05 13:50:13
我们现在用的是全式金的表达感受态细胞，BL21和TransB都是，但是也都是买了不长时间，真的可能是噬菌体污染了吗，哥们...

不好说。建议你把所用到的器材，培养基啥的全部用新灭的做一次试试，超净台也多紫外一会。噬菌体污染这事，真不是特别好排除哪步进去的。我们当年都不追究原因，赶紧改进后尝试下一次是王道。
赞一下 回复此楼
10楼2016-01-05 16:11:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Mr.四娃 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:47 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:36 by xSrQNSSjcgoX
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:25 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 09:35 by xSrQNSSjcgoX
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 02:48 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 8/400 2026-11-15 02:26 by xSrQNSSjcgoX
[文学芳草园] 厉娜 +4 张丹枫1991 2026-11-09 6/300 2026-11-15 00:48 by Equinoxhua
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-11 5/250 2026-11-12 11:44 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:22 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:20 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 YHiw1gou1Eda 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:14 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:32 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +8 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:21 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 3/150 2026-11-12 08:26 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:36 by 9fOTqj074tIg
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 7/350 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 8/400 2026-11-12 05:08 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭