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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达的时候养菌不成功 已有5人参与

如题,我想表达几组重组蛋白,构建重组质粒后转化Trans1-T1,然后养起来提取质粒测序都很顺利,测序结果也对,但是再转化BL21和Trans B来表达蛋白时却遇到了麻烦,平板上都长出来了,看着也很正常,但是挑菌放到液体培养基就不行了,一晚上过夜都长不出来,培养基还是很清,好几个重组蛋白都是这样,我想问有没有知道这是什么原因的大神啊,帮帮我,多谢啦。
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Mr.四娃(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:22:55
Mr.四娃: 金币+15, ★★★很有帮助 2016-01-07 08:50:31
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态,或者质粒重新转化提取一次。
3楼2016-01-05 09:48:03
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 刘氏响声丸 at 2016-01-05 16:53:39
连接做了两个多月才成功的路过,。。。。
...

不是吧,我还想一个月之内做出来,蛋白表达出来,顺便纯化呢
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
13楼2016-01-06 11:31:39
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普通回帖

Mr.四娃

金虫 (小有名气)

请大家帮帮忙吧,多谢
2楼2016-01-05 09:43:38
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2016-01-05 09:48:03
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态,或者质粒重新转化提取一次。

谢谢哥们啦。但是我好几种蛋白都是这样,质粒转化Trans1-T1就很好,一转化表达用的BL21就遇到问题了,而且BL21是平板上长得挺好,一接种到液体里面就不怎么长了,这很困惑啊
4楼2016-01-05 09:59:01
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qinqqjiajia

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
培养基的抗性添加的正确吗?是不是里面含有抑制重组质粒的试剂?
5楼2016-01-05 10:09:44
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by qinqqjiajia at 2016-01-05 10:09:44
培养基的抗性添加的正确吗?是不是里面含有抑制重组质粒的试剂?

肯定正确,我的培养基只加了氨苄,而且养Trans1-T1就可以,养表达的菌就不行了,真是愁死了
6楼2016-01-05 10:23:58
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Mr.四娃 at 2016-01-05 09:59:01
谢谢哥们啦。但是我好几种蛋白都是这样,质粒转化Trans1-T1就很好,一转化表达用的BL21就遇到问题了,而且BL21是平板上长得挺好,一接种到液体里面就不怎么长了,这很困惑啊...

如果真是噬菌体污染,一般在平板上长大没事,偶见噬菌斑,一转到液体培养就不行了。我以前很经常碰到。
7楼2016-01-05 13:00:23
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-01-05 19:23:15
还没做到这一步,才酶切连接这一块,连了两次都不成功,已接近崩溃
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
8楼2016-01-05 13:39:02
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by uulovelyuu at 2016-01-05 13:00:23
如果真是噬菌体污染,一般在平板上长大没事,偶见噬菌斑,一转到液体培养就不行了。我以前很经常碰到。...

我们现在用的是全式金的表达感受态细胞,BL21和TransB都是,但是也都是买了不长时间,真的可能是噬菌体污染了吗,哥们
9楼2016-01-05 13:50:13
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
Mr.四娃(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:24:09
引用回帖:
9楼: Originally posted by Mr.四娃 at 2016-01-05 13:50:13
我们现在用的是全式金的表达感受态细胞,BL21和TransB都是,但是也都是买了不长时间,真的可能是噬菌体污染了吗,哥们...

不好说。建议你把所用到的器材,培养基啥的全部用新灭的做一次试试,超净台也多紫外一会。噬菌体污染这事,真不是特别好排除哪步进去的。我们当年都不追究原因,赶紧改进后尝试下一次是王道。
10楼2016-01-05 16:11:40
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