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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达的时候养菌不成功 已有5人参与

如题,我想表达几组重组蛋白,构建重组质粒后转化Trans1-T1,然后养起来提取质粒测序都很顺利,测序结果也对,但是再转化BL21和Trans B来表达蛋白时却遇到了麻烦,平板上都长出来了,看着也很正常,但是挑菌放到液体培养基就不行了,一晚上过夜都长不出来,培养基还是很清,好几个重组蛋白都是这样,我想问有没有知道这是什么原因的大神啊,帮帮我,多谢啦。
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Mr.四娃(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:23:31
先确定抗生素有没有加错,平板上长出来的菌株作菌落PCR鉴定,如果是对的就换抗生素,感染噬菌体没有这么清澈,一般是先浑浊后澄清。有些公司的抗生素还是挺操蛋的,还有就是抗生素要自己配自己用,不要用别人的,很可能标错。
11楼2016-01-05 16:52:51
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

请大家帮帮忙吧,多谢
2楼2016-01-05 09:43:38
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Mr.四娃(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-05 19:22:55
Mr.四娃: 金币+15, ★★★很有帮助 2016-01-07 08:50:31
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态,或者质粒重新转化提取一次。
3楼2016-01-05 09:48:03
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Mr.四娃

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by uulovelyuu at 2016-01-05 09:48:03
很可能质粒或者感受态被噬菌体污染了。可以考虑换批感受态,或者质粒重新转化提取一次。

谢谢哥们啦。但是我好几种蛋白都是这样,质粒转化Trans1-T1就很好,一转化表达用的BL21就遇到问题了,而且BL21是平板上长得挺好,一接种到液体里面就不怎么长了,这很困惑啊
4楼2016-01-05 09:59:01
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