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家喻户晓

新虫 (小有名气)

[求助] 菌检 已有1人参与

我之前用一对引物58℃扩启动子，也扩出来了，现在连T载，挑阳性克隆，为什么一直没有，是不是加有酶切位点的引物的退火温度应该提高一点啊！

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1楼 2015-12-30 19:19:15
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家喻户晓

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 科学小覃 at 2015-12-30 20:11:08
T载体连接出现假阳性是常有的事，PCR只要有条带大小正确基本没问题，主要是纯化回收过程中，DNA一定要纯，连接时片段至少是载体的3倍以上。

纯化回收后测定的浓度时33.664ng/μL，连接时片段与T载比为7：1—9：1，但是挑斑菌检时都扩不出来
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7楼2015-12-30 21:35:35
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
T载体连接出现假阳性是常有的事，PCR只要有条带大小正确基本没问题，主要是纯化回收过程中，DNA一定要纯，连接时片段至少是载体的3倍以上。
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生物科学
2楼2015-12-30 20:11:08
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反应链

新虫 (正式写手)
Can you show me your agarose gel eletrophoresis of PCR products? Which polymerase did you use? Was there one A added at 3'-termini?
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3楼2015-12-30 20:34:46
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ayumi7667

新虫 (初入文坛)
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4楼2015-12-30 20:54:29
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