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tianzhen\\

新虫 (小有名气)

[交流] PCR问题

最右边是提取的DNA,左边亮的几个是pcr过的,请教各位大仙,这可能是出了什么问题?

PCR问题


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反应链

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
The genomic DNA has a good quality. But PCR products have high molecular weight smears and primer dimers. You can read the QAQ added.

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  • 附件 1 : smears.pdf
  • 2015-12-30 14:48:46, 198.53 K
2楼2015-12-30 14:48:48
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youyi

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引物二聚体,是不是退火温度的问题
3楼2015-12-31 08:34:42
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你上样量是多少,会不会因为上样量太多。

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4楼2015-12-31 08:49:40
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tianzhen\\

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2015-12-31 08:49:40
你上样量是多少,会不会因为上样量太多。

25u体系加样1u

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5楼2015-12-31 10:20:48
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tianzhen\\

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by youyi at 2015-12-31 08:34:42
引物二聚体,是不是退火温度的问题

退火54度。退火温度是高些高还是低些好?影响大吗?谢谢!

发自小木虫IOS客户端
6楼2015-12-31 10:23:09
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tianzhen\\

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 反应链 at 2015-12-30 14:48:48
The genomic DNA has a good quality. But PCR products have high molecular weight smears and primer dimers. You can read the QAQ added.

谢谢大神!我延伸时间为45s,会不会太短了?

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7楼2015-12-31 10:25:40
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szlylk0105

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
样品有挂孔拖尾现象,请问楼主跑胶的上样量是多少?
8楼2015-12-31 10:55:55
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tianzhen\\

新虫 (小有名气)

9楼2015-12-31 11:23:31
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huanglinmi

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
直接提取的DNA直接跑电泳很多情况都出不来条带,这个比较正常
你测过提取DNA的浓度没?有些试剂盒需要根据DNA的浓度计算上样量ng数的
如果这个没问题,那么你可以考虑一下是否是退火温度太低了点,我做PCR时退火温度都在60°左右。
Hi everyone!
10楼2015-12-31 15:20:03
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