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tianzhen\\

新虫 (小有名气)

[交流] PCR问题

最右边是提取的DNA，左边亮的几个是pcr过的，请教各位大仙，这可能是出了什么问题？

PCR问题


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1楼 2015-12-30 09:14:02
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反应链

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
The genomic DNA has a good quality. But PCR products have high molecular weight smears and primer dimers. You can read the QAQ added.
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    • 2015-12-30 14:48:46, 198.53 K
2楼2015-12-30 14:48:48
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youyi

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引物二聚体，是不是退火温度的问题
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3楼2015-12-31 08:34:42
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你上样量是多少，会不会因为上样量太多。

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4楼2015-12-31 08:49:40
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tianzhen\\

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2015-12-31 08:49:40
你上样量是多少，会不会因为上样量太多。

25u体系加样1u

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5楼2015-12-31 10:20:48
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tianzhen\\

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by youyi at 2015-12-31 08:34:42
引物二聚体，是不是退火温度的问题

退火54度。退火温度是高些高还是低些好？影响大吗？谢谢！

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6楼2015-12-31 10:23:09
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tianzhen\\

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 反应链 at 2015-12-30 14:48:48
The genomic DNA has a good quality. But PCR products have high molecular weight smears and primer dimers. You can read the QAQ added.

谢谢大神！我延伸时间为45s，会不会太短了？

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7楼2015-12-31 10:25:40
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szlylk0105

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
样品有挂孔拖尾现象，请问楼主跑胶的上样量是多少？
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8楼2015-12-31 10:55:55
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tianzhen\\

新虫 (小有名气)
5u

发自小木虫IOS客户端
9楼2015-12-31 11:23:31
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huanglinmi

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
直接提取的DNA直接跑电泳很多情况都出不来条带，这个比较正常
你测过提取DNA的浓度没？有些试剂盒需要根据DNA的浓度计算上样量ng数的
如果这个没问题，那么你可以考虑一下是否是退火温度太低了点，我做PCR时退火温度都在60°左右。
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Hi everyone!
10楼2015-12-31 15:20:03
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