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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 细菌提取RNA
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

[求助] 细菌提取RNA 已有2人参与

用了天根和promega的试剂盒，效果都不好。有大量DNA污染，因会严重影响后续实验的进行，想请教一下大家有什么好方法可以去除DNA或者好的提取方法。谢谢啦 

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1楼 2015-12-28 15:18:59
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uulovelyuu

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是加入到菌体太多导致裂解不充分？减少点样品量试试. 我也是用的天根的产品,里面有一管DNase I,基本能除干净啊.不知道你这两个牌子都用到哪款产品?
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2楼2015-12-28 15:26:42
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科学小覃

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA 污染组要是体系pH值过高，想想你加的样品有没有可能是pH升高。裂解可以补加3M的乙酸钠(pH4.5)。
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生物科学
3楼2015-12-28 19:45:46
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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by uulovelyuu at 2015-12-28 15:26:42
是不是加入到菌体太多导致裂解不充分？减少点样品量试试. 我也是用的天根的产品,里面有一管DNase I,基本能除干净啊.不知道你这两个牌子都用到哪款产品?

你一般加多少菌量，我最近做了一次，调了0.5麦氏，比以前少很多了，还有有DNA污染。请问你怎么验证没有DNA污染的？我是把提好的mRNA用普通DNA的试剂盒扩增相应的目的片段，结果跑胶有阳性结果，说明有DNA污染，这样对吗

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4楼2016-01-16 23:46:40
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chenfeng0823

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2016-01-16 23:46:40
你一般加多少菌量，我最近做了一次，调了0.5麦氏，比以前少很多了，还有有DNA污染。请问你怎么验证没有DNA污染的？我是把提好的mRNA用普通DNA的试剂盒扩增相应的目的片段，结果跑胶有阳性结果，说明有DNA污染，这样 ...

做特异基因的反转录的同时，加一个无反转录酶的对照，然后一起定量就OK了。
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5楼2016-01-28 10:41:31
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chenfeng0823

新虫 (初入文坛)
DNA消化不彻底，建议楼主换好一点的DNA酶，另可用水浴锅控温
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6楼2016-01-28 10:42:46
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