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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量pcr数据浮动
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雪怀

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr数据浮动 已有2人参与

第一天做的结果跟第二天再做就不一样了，同一个基因的变化趋势也不一样了。每个基因做了三个平行，重复性都很好，Ct值相差零点零几。但是为啥再做一遍重复性就不好？内参的Ct值比目的基因低，是否有关系？应该怎样调整？我用的是takara的SYBR green，请各位虫友相助！

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1楼 2015-12-28 09:00:02
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不下雨

铜虫 (小有名气)
SYBR Green I 或 II试剂本身及用量对荧光定量PCR的影响是否有研究？

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An ideal is a kind of power
2楼2015-12-28 09:11:27
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雪怀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不下雨 at 2015-12-28 09:11:27
SYBR Green I 或 II试剂本身及用量对荧光定量PCR的影响是否有研究？

并木有研究，两次都是按照说明书上的体系配的，不知是否会有影响？

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3楼2015-12-28 09:18:32
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不下雨

铜虫 (小有名气)
如果是只做了两次实验，不妨再做几组，看是否每次都相差很大

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An ideal is a kind of power
4楼2015-12-28 09:31:07
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xiong小瑞

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我直接用质粒做的qpcr，也会出现这种情况，每一次都会有差别，这和实验操作手法还有机器误差有关系吧，本来qpcr就是很灵敏的，不过我也是新手，刚刚才做完标准曲线
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5楼2015-12-29 17:05:49
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August99

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2015-12-29 22:01:53
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huanglinmi

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的DNA保存温度是否是-20°？反复冻存解冻的DNA跑qPCR肯定是有影响的。
另外内参的CT值比目的基因低，看看你的体系配的时候dNTP加样量加多了没，或者神马抑制剂多了点，dNTP多了会对qPCR产生抑制作用。
看看你的实验结果呗
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Hi everyone!
7楼2015-12-31 15:49:58
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