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雪怀

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量pcr数据浮动 已有2人参与

第一天做的结果跟第二天再做就不一样了,同一个基因的变化趋势也不一样了。每个基因做了三个平行,重复性都很好,Ct值相差零点零几。但是为啥再做一遍重复性就不好?内参的Ct值比目的基因低,是否有关系?应该怎样调整?我用的是takara的SYBR green,请各位虫友相助!

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不下雨

铜虫 (小有名气)

SYBR Green I 或 II试剂本身及用量对荧光定量PCR的影响是否有研究?

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An ideal is a kind of power
2楼2015-12-28 09:11:27
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雪怀

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不下雨 at 2015-12-28 09:11:27
SYBR Green I 或 II试剂本身及用量对荧光定量PCR的影响是否有研究?

并木有研究,两次都是按照说明书上的体系配的,不知是否会有影响?

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3楼2015-12-28 09:18:32
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不下雨

铜虫 (小有名气)

如果是只做了两次实验,不妨再做几组,看是否每次都相差很大

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An ideal is a kind of power
4楼2015-12-28 09:31:07
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xiong小瑞

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我直接用质粒做的qpcr,也会出现这种情况,每一次都会有差别,这和实验操作手法还有机器误差有关系吧,本来qpcr就是很灵敏的,不过我也是新手,刚刚才做完标准曲线
5楼2015-12-29 17:05:49
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August99

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

6楼2015-12-29 22:01:53
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huanglinmi

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的DNA保存温度是否是-20°?反复冻存解冻的DNA跑qPCR肯定是有影响的。
另外内参的CT值比目的基因低,看看你的体系配的时候dNTP加样量加多了没,或者神马抑制剂多了点,dNTP多了会对qPCR产生抑制作用。
看看你的实验结果呗
Hi everyone!
7楼2015-12-31 15:49:58
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