应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 3'RACE 求助
51/1返回列表
查看: 1463  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)

[求助] 3'RACE 求助 已有1人参与

最近在扩3‘，但是因为没有完整的ORF，所以导致3’略长，分别设计内外引物做降落PCR。。。可是都扩不出来，求大神是什么原因啊
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-12-24 22:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xygcdmr

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 凯伦爱佳佳 at 2015-12-25 22:59:03
最长的有1500bp。。。我直接用的降落PCR
那设计引物有什么特别要求么？...

如果条带多的话退火温度可以高一些65-68也是可以的，如果没有条带就要降低引物的退火温度啦。预测1500？有可能3‘end 更长，增加延伸时间试试吧
赞一下 回复此楼
5楼2015-12-26 11:57:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
是要重新设计引物？还是再扩一段，然后再做RACE
赞一下 回复此楼
2楼2015-12-25 11:40:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xygcdmr

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
凯伦爱佳佳: 金币+5, ★有帮助 2015-12-26 12:09:57
3‘RACE 一般很好做的。有预测大概的长度吗？先确定RNA, 反转录，引物都没问题，可能是3’端比较长，延伸时间不够吧。最后再考虑用降落PCR
赞一下 回复此楼
3楼2015-12-25 21:41:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凯伦爱佳佳

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xygcdmr at 2015-12-25 21:41:53
3‘RACE 一般很好做的。有预测大概的长度吗？先确定RNA, 反转录，引物都没问题，可能是3’端比较长，延伸时间不够吧。最后再考虑用降落PCR

最长的有1500bp。。。我直接用的降落PCR
那设计引物有什么特别要求么？
赞一下 回复此楼
4楼2015-12-25 22:59:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 3/150 2026-09-18 02:54 by cITaGg3p5edr
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-18 02:16 by cITaGg3p5edr
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-18 00:28 by cITaGg3p5edr
[考博] 申博发邮件 +6 Lmengk 2026-09-15 7/350 2026-09-17 23:36 by Lmengk
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-17 23:28 by cuPZTDXS3VOd
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-17 22:39 by cuPZTDXS3VOd
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 6/300 2026-09-17 14:17 by ObVzqQQh1rrE
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 mibUvS8DDCwf 2026-09-15 4/200 2026-09-17 06:26 by k06BKNblrGRH
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 01:38 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 22:26 by Tql5LQhh5rLK
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组｜2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:14 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:39 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭