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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 高保真酶
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宋宋6

新虫 (初入文坛)

[交流] 高保真酶 已有9人参与

最近总高保真酶primestar，死活扩不出来。怀疑是不是我程序的问题。你们都是怎么设置程序的？而且还遇到一个问题是，pcr为什么有时候出带，有时候不出带呢。

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1楼 2015-12-23 19:11:15
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叶小虫10

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by X小天T at 2015-12-25 12:24:25
takara，预变性温度我们用的95℃，变性温度，普通的94℃ 变性时间30s。高保真是98℃ 变性时间10s，我们是这么做的。
...

跑出来了么

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12楼2016-06-02 14:17:20
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X小天T

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
程序的话按照说明书上的一般没问题，只不过不同的引物所需要的退火温度不同，所以，最好先用梯度PCR，普通的酶，确定最佳退火温度，然后再用高保真酶P目的片段。还有，你的目的条带是不是特别长，要根据不同长度设置延伸时间（我们用的TAKARA的酶，是说明书上的的时间的1.5倍）。对于不出条带原因是多方面的，具体原因具体分析（额...感觉想废话一样，不过确实是这样）
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2楼2015-12-23 21:02:17
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scofield111

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
退火温度做梯度，真有钱，prime star 贵死

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3楼2015-12-24 11:57:41
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足下客

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
保真性越好，扩增效率越低。高保真酶就是不好扩，而且有些基因本身就是不好扩的。
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4楼2015-12-24 14:08:25
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