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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » A7r5冻存后复苏，大面积死亡
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tylll

铜虫 (初入文坛)

[求助] A7r5冻存后复苏，大面积死亡

最近在养A7r5，收到细胞后用DMEM+10%GIBCO血清培养及冻存（1x10^6每管，1:9=DMSO：FBS），倍增时间约48h，复苏后细胞大片死亡，一管细胞在6cm皿中要长两周左右才能长满，检测没有支原体污染，请问这是为什么呢？  看别人用相同条件养的挺好的，是需要加入明胶等基质或NEAA、谷氨酰胺、β-ME之类的试剂吗？
   我昨天复苏了2x10^6到6cm皿，今天观察很多细胞贴在皿底没有伸展开，估计明天又会死一大片，

   请教一下内皮细胞的培养条件中需要加些什么试剂？你们的培养条件是怎么样的？着急哟。
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上弦月
1楼2015-12-22 19:10:02
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北国佳人

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
tylll(wizardfan代发): 金币+20, 感谢应助 2015-12-24 06:29:06
慢冻快复，，复苏时操作快些，
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努力的小蜜蜂
2楼2015-12-22 20:09:26
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tylll

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-22 20:09:26
慢冻快复，，复苏时操作快些，

谢谢，我在冻存时用梯度降温盒放置-80℃过夜，复苏从取出到放入培养箱控制在5min。我前天复苏了一支细胞，今天观察发现细胞贴壁但不伸展。另外我尝试换血清（密理博）和添加谷氨酰胺、非必需氨基酸和丙酮酸钠，前者细胞较亮，死细胞多，后者死细胞少而状态不佳。请问该细胞需要长时间（48h）静止培养吗，谢谢。
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上弦月
3楼2015-12-23 10:13:42
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jindianama

新虫 (初入文坛)
楼主需不需要效果更好的贴壁培养皿
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4楼2015-12-28 13:37:23
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tylll

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jindianama at 2015-12-28 13:37:23
楼主需不需要效果更好的贴壁培养皿

谢谢，正在买cell bind。
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上弦月
5楼2016-01-07 18:42:20
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tylll

铜虫 (初入文坛)
是细胞冻存数量太少，问了客服（出了问题才问，大家别学我）才知冻存5百万细胞比较合适。
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上弦月
6楼2016-01-07 18:44:35
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半夏姑娘

禁虫 (正式写手)
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7楼2017-07-23 00:43:21
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