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tylll

铜虫 (初入文坛)

[求助] A7r5冻存后复苏,大面积死亡

最近在养A7r5,收到细胞后用DMEM+10%GIBCO血清培养及冻存(1x10^6每管,1:9=DMSO:FBS),倍增时间约48h,复苏后细胞大片死亡,一管细胞在6cm皿中要长两周左右才能长满,检测没有支原体污染,请问这是为什么呢?  看别人用相同条件养的挺好的,是需要加入明胶等基质或NEAA、谷氨酰胺、β-ME之类的试剂吗?
   我昨天复苏了2x10^6到6cm皿,今天观察很多细胞贴在皿底没有伸展开,估计明天又会死一大片,

   请教一下内皮细胞的培养条件中需要加些什么试剂?你们的培养条件是怎么样的?着急哟。
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上弦月
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tylll

铜虫 (初入文坛)

是细胞冻存数量太少,问了客服(出了问题才问,大家别学我)才知冻存5百万细胞比较合适。
上弦月
6楼2016-01-07 18:44:35
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
tylll(wizardfan代发): 金币+20, 感谢应助 2015-12-24 06:29:06
慢冻快复,,复苏时操作快些,
努力的小蜜蜂
2楼2015-12-22 20:09:26
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tylll

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 北国佳人 at 2015-12-22 20:09:26
慢冻快复,,复苏时操作快些,

谢谢,我在冻存时用梯度降温盒放置-80℃过夜,复苏从取出到放入培养箱控制在5min。我前天复苏了一支细胞,今天观察发现细胞贴壁但不伸展。另外我尝试换血清(密理博)和添加谷氨酰胺、非必需氨基酸和丙酮酸钠,前者细胞较亮,死细胞多,后者死细胞少而状态不佳。请问该细胞需要长时间(48h)静止培养吗,谢谢。
上弦月
3楼2015-12-23 10:13:42
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jindianama

新虫 (初入文坛)

楼主需不需要效果更好的贴壁培养皿
4楼2015-12-28 13:37:23
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