9楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-23 14:51:21
哦，你用的是染料法，我们都是用TaqMan探针。你预实验做过吗？跑普通PCR，电泳条带怎么样？Tm值是多少？目的基因和内参基因有多少bp?...

14楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-23 15:41:12
再就是你的内参基因是不是和目的基因在一个模板上？内参基因一般都是用人工构建的质粒，这样方便调节浓度。如果和目的基因在一个模板上，内参基因没法调整浓度。一般内参质粒原液要用TE至少稀释10000倍以上

15楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-12-24 08:39:06
我内参基因与目的基因都是用的CDNA，用的是宝生物的试剂盒，...

17楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-24 08:47:11
最好是重新设计引物，引物的Tm值在58度以上。内参不要用cDNA。

18楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-12-24 10:50:59
内参基因用什么模板，我的师姐是做发酵的，我做分子，都得自己想，万分感谢你帮助我
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19楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-24 11:57:31
内参我们是用的人工合成的质粒，可以把你的内参基因连接到载体上，然后转大肠，挑单克隆，提取质粒。测一下质粒浓度，再稀释，就可以作为内参了，跟目的基因的模板一起加入反应溶液中，内参加的量很少，25微升体系 ...