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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR实验数据求助 已有1人参与

我分别用目的基因与内参基因及阴性对照做了荧光定量的预实验,结果如下图,用了两对引物,第三附图中前一个峰是目的基因,后一个峰是内参基因的,这样的实验结果能用吗?

荧光定量PCR实验数据求助
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足下客

木虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-12-24 08:39:06
我内参基因与目的基因都是用的CDNA,用的是宝生物的试剂盒,...

按照试剂盒的说明书操作一般是没问题的。建议你先不加内参基因的引物,只扩增目的基因看看,是否目的基因的扩增正常。内参基因和目的基因不能用相同的cDNA。那样就失去内参的意义了。对于内参的选择标准你得搞明白,要比目的基因的扩增效率低,而且荧光增峰也要比目的基因低。  你这个实验可能要重新设计了,你最好是问一下做过的师兄师姐,因为我不知道具体情况,所以也没法细说。
16楼2015-12-24 08:45:48
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足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你第一幅图的扩增曲线,第一条曲线的Ct值那么靠前,显然是不对的。而且你的内参基因的扩增荧光增峰值怎么会那么低,整个扩增就有问题

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2楼2015-12-22 15:54:41
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取个什么名啊

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-22 15:54:41
看你第一幅图的扩增曲线,第一条曲线的Ct值那么靠前,显然是不对的。而且你的内参基因的扩增荧光增峰值怎么会那么低,整个扩增就有问题

第一条曲线的CT值是内参的。关于扩增荧光峰值,你做的是多少,内参的CT值怎么处理。求帮助
3楼2015-12-22 19:27:00
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足下客

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-12-22 19:27:00
第一条曲线的CT值是内参的。关于扩增荧光峰值,你做的是多少,内参的CT值怎么处理。求帮助...

Ct值我们一般都是在18以后,内参的浓度你自己要控制好,如果浓度很高,你要先用TE稀释。荧光增峰我们一般至少在1000-2000,大部分情况都在2500左右。不知道你扩的是DNA还是RNA,你的反应体系可能有问题
4楼2015-12-23 09:10:35
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