24小时热门版块排行榜    

查看: 1388  |  回复: 25
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

取个什么名啊

木虫 (正式写手)

[求助] 荧光定量PCR实验数据求助 已有1人参与

我分别用目的基因与内参基因及阴性对照做了荧光定量的预实验,结果如下图,用了两对引物,第三附图中前一个峰是目的基因,后一个峰是内参基因的,这样的实验结果能用吗?

荧光定量PCR实验数据求助
IMG_20151222_131208.jpg


荧光定量PCR实验数据求助-1
IMG_20151222_131652.jpg


荧光定量PCR实验数据求助-2
IMG_20151222_132252.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

足下客

木虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-12-24 08:39:06
我内参基因与目的基因都是用的CDNA,用的是宝生物的试剂盒,...

按照试剂盒的说明书操作一般是没问题的。建议你先不加内参基因的引物,只扩增目的基因看看,是否目的基因的扩增正常。内参基因和目的基因不能用相同的cDNA。那样就失去内参的意义了。对于内参的选择标准你得搞明白,要比目的基因的扩增效率低,而且荧光增峰也要比目的基因低。  你这个实验可能要重新设计了,你最好是问一下做过的师兄师姐,因为我不知道具体情况,所以也没法细说。
16楼2015-12-24 08:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 26 个回答

足下客

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你第一幅图的扩增曲线,第一条曲线的Ct值那么靠前,显然是不对的。而且你的内参基因的扩增荧光增峰值怎么会那么低,整个扩增就有问题

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-12-22 15:54:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

取个什么名啊

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 足下客 at 2015-12-22 15:54:41
看你第一幅图的扩增曲线,第一条曲线的Ct值那么靠前,显然是不对的。而且你的内参基因的扩增荧光增峰值怎么会那么低,整个扩增就有问题

第一条曲线的CT值是内参的。关于扩增荧光峰值,你做的是多少,内参的CT值怎么处理。求帮助
3楼2015-12-22 19:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

足下客

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 取个什么名啊 at 2015-12-22 19:27:00
第一条曲线的CT值是内参的。关于扩增荧光峰值,你做的是多少,内参的CT值怎么处理。求帮助...

Ct值我们一般都是在18以后,内参的浓度你自己要控制好,如果浓度很高,你要先用TE稀释。荧光增峰我们一般至少在1000-2000,大部分情况都在2500左右。不知道你扩的是DNA还是RNA,你的反应体系可能有问题
4楼2015-12-23 09:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +8 a089 2026-08-07 8/400 2026-08-14 18:46 by beefly
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-14 18:36 by 正能量1斤
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见