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angiexx

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教电泳跑胶电压和时间 已有1人参与

大家好,我刚接触分子生物学,提取的DNA片段应该在15000bp以上,电泳用的宝生物的15000bp marker,按理说有7条条带,为何我跑出来只有3条呢?跑胶电压140V,浓度1%(0.25g琼脂糖,25mL 0.5倍TBE),可能加热过程有挥发,浓度实际比1%高,跑胶时间35min,前面蓝色的条带已经跑到了胶中间。
我问过生物专业的同学大多电压不超过110,但我之前一直用1%的胶,180V,跑20min,如果目的片段只有100~500bp,条件180V,20min,胶浓度1%可以吗?100bp和150bp的片段,1%的胶180V 20min可以区分开吗?谢谢大家!

请教电泳跑胶电压和时间
20151217DNAtiqu.jpg
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hmz2007

银虫 (正式写手)

你按照marker说明书里面的条件跑,才能出来相似的结果,不要太盲目。此外一百多的,如果各条带差异小,就要用4%左右的,跑的45min才能好看

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4楼2015-12-17 23:23:47
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雪狼X

新虫 (初入文坛)

我们做的实验是150V电压,跑20min。

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2楼2015-12-17 18:21:47
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angiexx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 雪狼X at 2015-12-17 18:21:47
我们做的实验是150V电压,跑20min。

不管多长bp,都是150V  20min吗?胶是1%的吗?

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3楼2015-12-17 23:16:29
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hmz2007

银虫 (正式写手)

多看分子克隆书,跑胶是基础,有大学问

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5楼2015-12-17 23:24:47
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chenllili

铜虫 (正式写手)

样品提取的不错,上样量多了,只是看提取的结果,marker点4ul,就足够了,

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6楼2015-12-18 00:12:47
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暮色西荷

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
angiexx: 金币+6, 有帮助 2015-12-18 12:37:40
150V,100V,120V都跑过,一般发文章的图低电压跑的漂亮;平常做实验就大电压跑的快,不耽误事

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7楼2015-12-18 00:16:57
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chenllili

铜虫 (正式写手)

胶充分溶解,倒板后静置30-60分钟分钟,室温低的话静置30分钟就可以用了,室温高的话就延长时间,时间过短凝固不充分,时间过长胶容易干。如果超过1小时不用,凝固后可在表面倒些电泳液,保持胶的湿润。

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8楼2015-12-18 00:20:12
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ld梁冬

铜虫 (小有名气)

9楼2015-12-18 07:24:18
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xzw1991

金虫 (小有名气)

点样有点多,减少样品的点样量,低电压多跑一段时间试试。

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10楼2015-12-18 10:38:23
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