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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请教电泳跑胶电压和时间
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angiexx

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教电泳跑胶电压和时间 已有1人参与

大家好，我刚接触分子生物学，提取的DNA片段应该在15000bp以上，电泳用的宝生物的15000bp marker，按理说有7条条带，为何我跑出来只有3条呢？跑胶电压140V，浓度1%（0.25g琼脂糖，25mL 0.5倍TBE），可能加热过程有挥发，浓度实际比1%高，跑胶时间35min，前面蓝色的条带已经跑到了胶中间。
我问过生物专业的同学大多电压不超过110,但我之前一直用1%的胶，180V，跑20min，如果目的片段只有100~500bp，条件180V,20min，胶浓度1%可以吗？100bp和150bp的片段，1%的胶180V 20min可以区分开吗？谢谢大家！

请教电泳跑胶电压和时间
20151217DNAtiqu.jpg
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1楼 2015-12-17 17:56:49
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angiexx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 洛可可薇薇 at 2015-12-18 14:15:38
其实电压120v也是可以的，跑30——40分钟。TBE溶液是：50倍TBE，加1000ml去离子水配制的。如果是1/2胶，用0.4g琼脂糖加入40mlTBE缓冲液，后加入1.4ulGenegreen，以此类推1/4和整版胶的配方。至于DNA的目的片段我还从 ...

我们用的0.5倍的TBE，那倒是，可以用就可以～

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17楼2015-12-18 14:37:51
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雪狼X

新虫 (初入文坛)
我们做的实验是150V电压，跑20min。

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2楼2015-12-17 18:21:47
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angiexx

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 雪狼X at 2015-12-17 18:21:47
我们做的实验是150V电压，跑20min。

不管多长bp，都是150V  20min吗？胶是1%的吗？

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3楼2015-12-17 23:16:29
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hmz2007

银虫 (正式写手)
你按照marker说明书里面的条件跑，才能出来相似的结果，不要太盲目。此外一百多的，如果各条带差异小，就要用4%左右的，跑的45min才能好看

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4楼2015-12-17 23:23:47
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