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angiexx

新虫 (初入文坛)

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虫号: 3091638
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专业: 环境工程

[求助] 请教电泳跑胶电压和时间已有1人参与

大家好，我刚接触分子生物学，提取的DNA片段应该在15000bp以上，电泳用的宝生物的15000bp marker，按理说有7条条带，为何我跑出来只有3条呢？跑胶电压140V，浓度1%（0.25g琼脂糖，25mL 0.5倍TBE），可能加热过程有挥发，浓度实际比1%高，跑胶时间35min，前面蓝色的条带已经跑到了胶中间。
我问过生物专业的同学大多电压不超过110,但我之前一直用1%的胶，180V，跑20min，如果目的片段只有100~500bp，条件180V,20min，胶浓度1%可以吗？100bp和150bp的片段，1%的胶180V 20min可以区分开吗？谢谢大家！

20151217DNAtiqu.jpg

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1楼 2015-12-17 17:56:49

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洛可可薇薇

铁虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 2853753
注册: 2013-12-06
专业: 植物遗传学

其实电压120v也是可以的，跑30——40分钟。TBE溶液是：50倍TBE，加1000ml去离子水配制的。如果是1/2胶，用0.4g琼脂糖加入40mlTBE缓冲液，后加入1.4ulGenegreen，以此类推1/4和整版胶的配方。至于DNA的目的片段我还从未关心过....如果检测的OD值和浓度没问题，再上琼脂糖跑胶，只要有明亮的条带，就可以用的。从图上可以看出你的DNA条带很亮，浓度很浓。可以用。