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angiexx

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教电泳跑胶电压和时间 已有1人参与

大家好,我刚接触分子生物学,提取的DNA片段应该在15000bp以上,电泳用的宝生物的15000bp marker,按理说有7条条带,为何我跑出来只有3条呢?跑胶电压140V,浓度1%(0.25g琼脂糖,25mL 0.5倍TBE),可能加热过程有挥发,浓度实际比1%高,跑胶时间35min,前面蓝色的条带已经跑到了胶中间。
我问过生物专业的同学大多电压不超过110,但我之前一直用1%的胶,180V,跑20min,如果目的片段只有100~500bp,条件180V,20min,胶浓度1%可以吗?100bp和150bp的片段,1%的胶180V 20min可以区分开吗?谢谢大家!

请教电泳跑胶电压和时间
20151217DNAtiqu.jpg
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洛可可薇薇

铁虫 (小有名气)

其实电压120v也是可以的,跑30——40分钟。TBE溶液是:50倍TBE,加1000ml去离子水配制的。如果是1/2胶,用0.4g琼脂糖加入40mlTBE缓冲液,后加入1.4ulGenegreen,以此类推1/4和整版胶的配方。至于DNA的目的片段我还从未关心过....如果检测的OD值和浓度没问题,再上琼脂糖跑胶,只要有明亮的条带,就可以用的。从图上可以看出你的DNA条带很亮,浓度很浓。可以用。
16楼2015-12-18 14:15:38
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雪狼X

新虫 (初入文坛)

我们做的实验是150V电压,跑20min。

发自小木虫Android客户端
2楼2015-12-17 18:21:47
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angiexx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 雪狼X at 2015-12-17 18:21:47
我们做的实验是150V电压,跑20min。

不管多长bp,都是150V  20min吗?胶是1%的吗?

发自小木虫Android客户端
3楼2015-12-17 23:16:29
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hmz2007

银虫 (正式写手)

你按照marker说明书里面的条件跑,才能出来相似的结果,不要太盲目。此外一百多的,如果各条带差异小,就要用4%左右的,跑的45min才能好看

发自小木虫Android客户端
4楼2015-12-17 23:23:47
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