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alice keer

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌菌丝提取及电泳图求解释！ 已有1人参与

用CTAB提取法提取真菌DNA,但是抽提DNA过程中只用了氯仿/异戊醇（24:1），没有使用Tris饱和酚抽提。在1%琼脂糖凝胶电泳中检测有无条带，如下图所示，请教各位大神：这是什么原因？
急需，感激不尽。。。。。。

真菌菌丝提取及电泳图求解释！
20151216DNA(SHEN).jpg
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1楼 2015-12-16 20:17:24
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反应链

新虫 (正式写手)
The 4th step would be the problem. The order is different from my CTAB protocol, which is "Add 0.5 volume 5M NaCl and mix properly. Then add 2/3 volume ice-cold isopropanol and leave at least 20minutes (up to overnight) at -20 degrees Celsiu."

It must be pointed out that once DNA and polysaccharides co-precipitate together, it becomes much more difficult to separate them than prior to precipitation. By adding 0.5 volum 5M NaCl to the CI-extracted aqueous solution just prior to precipitation by isopropanol, it is effectivly separate the DNA from polysaccarides. In my opinion, this step is the key to CTAB protocol.
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  • 附件 1 : 3%_CTAB_DNA_Extraction_Protocol.pdf
    • 2016-01-08 16:09:12, 50.16 K

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

alice keer
6楼2016-01-08 16:09:13
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zyk1369

新虫 (初入文坛)
你提的什么孢子粉，我提的小麦白粉病孢子粉也是，只有RNA，没有DNA,急死了
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2楼2015-12-17 15:51:36
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angelyou

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
alice keer: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢你啦，marker我用的是5000的，太小了 2015-12-19 10:31:05
建议你把你做的全部步骤写上来，理论上我们CTAB提都是百发百中，没有提不出来的~~~而且没有酚应该也不至于啥都没有，另外跑基因组DNA你要用HINDiii的maker或者其他大于10k的maker，我猜，你第二泳道上面那个弱弱的有可能是，但是5000的maker看不出来那个带多大
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3楼2015-12-17 21:24:18
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alice keer

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zyk1369 at 2015-12-17 15:51:36
你提的什么孢子粉，我提的小麦白粉病孢子粉也是，只有RNA，没有DNA,急死了

镰刀菌
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4楼2015-12-19 10:31:19
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