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alice keer

新虫 (初入文坛)

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专业: 植物病理学

[求助] 真菌菌丝提取及电泳图求解释！已有1人参与

用CTAB提取法提取真菌DNA,但是抽提DNA过程中只用了氯仿/异戊醇（24:1），没有使用Tris饱和酚抽提。在1%琼脂糖凝胶电泳中检测有无条带，如下图所示，请教各位大神：这是什么原因？
急需，感激不尽。。。。。。

20151216DNA(SHEN).jpg

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1楼 2015-12-16 20:17:24

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反应链

新虫 (正式写手)

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专业: 免疫学

The 4th step would be the problem. The order is different from my CTAB protocol, which is "Add 0.5 volume 5M NaCl and mix properly. Then add 2/3 volume ice-cold isopropanol and leave at least 20minutes (up to overnight) at -20 degrees Celsiu."

It must be pointed out that once DNA and polysaccharides co-precipitate together, it becomes much more difficult to separate them than prior to precipitation. By adding 0.5 volum 5M NaCl to the CI-extracted aqueous solution just prior to precipitation by isopropanol, it is effectivly separate the DNA from polysaccarides. In my opinion, this step is the key to CTAB protocol.