应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 真菌菌丝提取及电泳图求解释！
51/1返回列表
查看: 2063  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

alice keer

新虫 (初入文坛)

[求助] 真菌菌丝提取及电泳图求解释！ 已有1人参与

用CTAB提取法提取真菌DNA,但是抽提DNA过程中只用了氯仿/异戊醇（24:1），没有使用Tris饱和酚抽提。在1%琼脂糖凝胶电泳中检测有无条带，如下图所示，请教各位大神：这是什么原因？
急需，感激不尽。。。。。。

真菌菌丝提取及电泳图求解释！
20151216DNA(SHEN).jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-12-16 20:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alice keer

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by angelyou at 2015-12-17 21:24:18
建议你把你做的全部步骤写上来，理论上我们CTAB提都是百发百中，没有提不出来的~~~而且没有酚应该也不至于啥都没有，另外跑基因组DNA你要用HINDiii的maker或者其他大于10k的maker，我猜，你第二泳道上面那个弱弱的有 ...

1、用灭菌刀片（一般用酒精蘸取后在酒精灯上灼烧），刮取菌丝置于研钵中，加入适量石英砂和液氮迅速研磨2-3次确保磨成细粉（注意带厚手套防冻及确保研磨过程中一直有液氮保护，最后一次研磨完倒入液氮保护，等待转移到离心管中）
2、将研钵中的细粉迅速转移到1.5ML的离心管中，加入65℃预热的800ul 2%CTAB提取缓冲液和80ul10%SDS（也可以不用SDS），快速混匀，65℃水浴30-60Min，5-10min轻柔振荡一次。
3、12000rpm常温离心5min（一般也用10min），缓慢吸取上清液于一个新的离心管中（注意：有些离心完上层有Pr固体，吸取时注意不要吸到Pr等固体层），加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）混合液抽提2次（有些也用氯仿和异戊醇或只用氯仿），10000-12000rpm离心10min
4、缓慢吸取上清液于一个新的离心管中，缓慢加入2.5体积的异丙醇（去除多糖）无水乙醇，再加入0.1体积的3mol/L的NaAC（注意顺序）-20℃沉淀过夜
5、10000-12000rpm离心10min，丢弃上清液（倒置使管壁液体流干净）
6、加入70%乙醇漂洗2次
7、斜拿离心管，用移液枪从沉淀的对面紧贴管壁处轻轻吸出乙醇，在室温中敞盖干燥
8、所得沉淀溶于50ulTE缓冲液（或者ddH2O，双蒸水是其中的一种）中，最后置于-20℃保存
赞一下 回复此楼
5楼2015-12-19 10:33:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

zyk1369

新虫 (初入文坛)
你提的什么孢子粉，我提的小麦白粉病孢子粉也是，只有RNA，没有DNA,急死了
赞一下 回复此楼
2楼2015-12-17 15:51:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

angelyou

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
alice keer: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢你啦，marker我用的是5000的，太小了 2015-12-19 10:31:05
建议你把你做的全部步骤写上来，理论上我们CTAB提都是百发百中，没有提不出来的~~~而且没有酚应该也不至于啥都没有，另外跑基因组DNA你要用HINDiii的maker或者其他大于10k的maker，我猜，你第二泳道上面那个弱弱的有可能是，但是5000的maker看不出来那个带多大
赞一下 回复此楼
3楼2015-12-17 21:24:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alice keer

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zyk1369 at 2015-12-17 15:51:36
你提的什么孢子粉，我提的小麦白粉病孢子粉也是，只有RNA，没有DNA,急死了

镰刀菌
回复此楼
4楼2015-12-19 10:31:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +8 硕星赴 2026-03-23 8/400 2026-03-24 20:17 by peike
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +15 吃吃吃才有意义 2026-03-19 16/800 2026-03-24 19:51 by 了了了了。。
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，一志愿:南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭