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杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] FITC标记的二抗和HRP标记的二抗有什么区别?已有3人参与

FITC标记的二抗和HRP标记的二抗有什么区别?
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 杨仔儿 at 2015-12-15 20:59:09
有金币

请大侠告知

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2015-12-15 20:59:22
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

有金币

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-12-15 20:59:09
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
FITC为荧光基团,,最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长为520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。如果FITC标记的二抗和一抗结合上了,去除没有结合一抗的FITC标记的二抗,就可以直接进行荧光读数了,产生的荧光信号就代表一抗二抗结合在一起的量。HRP为辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP),其本身并不产生信号,需要另外加入该酶的底物如TMB后,催化底物产生有信号的产物,多一步加底物显色的过程。FITC读数需要一起能够读荧光(fluorescence )的功能,而用HRP显色需要另外购置底物,底物不一样读数的方式也不一样,TMB读吸光度absorbance,另外的底物Amplex Red也能够读荧光fluorescence或者其他底物读化学发光Luminescence
4楼2015-12-15 21:44:07
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mutant

铁虫 (小有名气)

FITC带的荧光标记,只有借助荧光显微镜才能观察,而HRP带的是辣根过氧根集团,需要显色剂DAP才能显色,一般在普通光镜下就可以观察
5楼2015-12-15 21:44:28
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