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杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] FITC标记的二抗和HRP标记的二抗有什么区别？ 已有3人参与

FITC标记的二抗和HRP标记的二抗有什么区别？
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1楼 2015-12-15 16:51:39
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
FITC为荧光基团，,最大吸收光波长为490～495nm,最大发射光波长为520～530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。如果FITC标记的二抗和一抗结合上了，去除没有结合一抗的FITC标记的二抗，就可以直接进行荧光读数了，产生的荧光信号就代表一抗二抗结合在一起的量。HRP为辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP），其本身并不产生信号，需要另外加入该酶的底物如TMB后，催化底物产生有信号的产物，多一步加底物显色的过程。FITC读数需要一起能够读荧光（fluorescence ）的功能，而用HRP显色需要另外购置底物，底物不一样读数的方式也不一样，TMB读吸光度absorbance，另外的底物Amplex Red也能够读荧光fluorescence或者其他底物读化学发光Luminescence
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4楼2015-12-15 21:44:07
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mutant

铁虫 (小有名气)
FITC带的荧光标记，只有借助荧光显微镜才能观察，而HRP带的是辣根过氧根集团，需要显色剂DAP才能显色，一般在普通光镜下就可以观察
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5楼2015-12-15 21:44:28
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wangjin1981

金虫 (正式写手)

念念不忘，必有回响

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 杨仔儿 at 2015-12-16 10:53:56
那我用FITC做western ,是不是加带FITC的二抗孵育后马上在荧光显微镜下观察？
...

具体我不清楚，但是之前量子高科的一位客户跟我反应过这个问题，你可以在你实验过程中也观察一下。
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to be or not to be
10楼2015-12-17 09:04:44
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普通回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)
有金币

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2楼2015-12-15 20:59:09
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 杨仔儿 at 2015-12-15 20:59:09
有金币

请大侠告知

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3楼2015-12-15 20:59:22
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-15 21:44:07
FITC为荧光基团，,最大吸收光波长为490～495nm,最大发射光波长为520～530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。如果FITC标记的二抗和一抗结合上了，去除没有结合一抗的FITC标记的二抗，就可以直接进行荧光读数了，产生的荧光信 ...

谢谢

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6楼2015-12-15 22:14:43
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mutant at 2015-12-15 21:44:28
FITC带的荧光标记，只有借助荧光显微镜才能观察，而HRP带的是辣根过氧根集团，需要显色剂DAP才能显色，一般在普通光镜下就可以观察

啊，知道了，功能是一样的，只是需要借助的外物不同，开观察荧光

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7楼2015-12-15 22:15:32
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wangjin1981

金虫 (正式写手)

念念不忘，必有回响

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
FITC的半衰期短，容易在实验过程中荧光消失
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to be or not to be
8楼2015-12-16 09:11:50
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杨仔儿

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wangjin1981 at 2015-12-16 09:11:50
FITC的半衰期短，容易在实验过程中荧光消失

那我用FITC做western ,是不是加带FITC的二抗孵育后马上在荧光显微镜下观察？

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9楼2015-12-16 10:53:56
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