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杨仔儿

木虫 (著名写手)

[求助] FITC标记的二抗和HRP标记的二抗有什么区别?已有3人参与

FITC标记的二抗和HRP标记的二抗有什么区别?
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

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FITC为荧光基团,,最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长为520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。如果FITC标记的二抗和一抗结合上了,去除没有结合一抗的FITC标记的二抗,就可以直接进行荧光读数了,产生的荧光信号就代表一抗二抗结合在一起的量。HRP为辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP),其本身并不产生信号,需要另外加入该酶的底物如TMB后,催化底物产生有信号的产物,多一步加底物显色的过程。FITC读数需要一起能够读荧光(fluorescence )的功能,而用HRP显色需要另外购置底物,底物不一样读数的方式也不一样,TMB读吸光度absorbance,另外的底物Amplex Red也能够读荧光fluorescence或者其他底物读化学发光Luminescence
4楼2015-12-15 21:44:07
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mutant

铁虫 (小有名气)

FITC带的荧光标记,只有借助荧光显微镜才能观察,而HRP带的是辣根过氧根集团,需要显色剂DAP才能显色,一般在普通光镜下就可以观察
5楼2015-12-15 21:44:28
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wangjin1981

金虫 (正式写手)

念念不忘,必有回响

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9楼: Originally posted by 杨仔儿 at 2015-12-16 10:53:56
那我用FITC做western ,是不是加带FITC的二抗孵育后马上在荧光显微镜下观察?
...

具体我不清楚,但是之前量子高科的一位客户跟我反应过这个问题,你可以在你实验过程中也观察一下。
to be or not to be
10楼2015-12-17 09:04:44
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

有金币

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2楼2015-12-15 20:59:09
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

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2楼: Originally posted by 杨仔儿 at 2015-12-15 20:59:09
有金币

请大侠告知

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3楼2015-12-15 20:59:22
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yyy0305 at 2015-12-15 21:44:07
FITC为荧光基团,,最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长为520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。如果FITC标记的二抗和一抗结合上了,去除没有结合一抗的FITC标记的二抗,就可以直接进行荧光读数了,产生的荧光信 ...

谢谢

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6楼2015-12-15 22:14:43
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

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5楼: Originally posted by mutant at 2015-12-15 21:44:28
FITC带的荧光标记,只有借助荧光显微镜才能观察,而HRP带的是辣根过氧根集团,需要显色剂DAP才能显色,一般在普通光镜下就可以观察

啊,知道了,功能是一样的,只是需要借助的外物不同,开观察荧光

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7楼2015-12-15 22:15:32
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wangjin1981

金虫 (正式写手)

念念不忘,必有回响

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FITC的半衰期短,容易在实验过程中荧光消失
to be or not to be
8楼2015-12-16 09:11:50
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杨仔儿

木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by wangjin1981 at 2015-12-16 09:11:50
FITC的半衰期短,容易在实验过程中荧光消失

那我用FITC做western ,是不是加带FITC的二抗孵育后马上在荧光显微镜下观察?

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9楼2015-12-16 10:53:56
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